液相色谱

我用的是aglient的柱子：SB-C18，在5-20日用的时候测了下柱效： Rt=4.000，plate=10677
                                                                  5-21日用完再测柱效：       Rt=4.031，plate=10335。
在这个使用过程中都还正常，但到了6-1日需要再用时，开始测柱效：Rt=3.966，plate=6053。之后我测了好几次，都是这样。测柱效的条件是甲醇：水=70：30；流速2ml/min；柱温30°。请问中间的几天我没有使用，柱效怎么会下降那么厉害，后来我用乙腈100%冲洗好几个小时，柱效也没有回升，大家请帮帮忙，帮我看看是怎么回事？我想用异丙醇冲洗，但没有色谱纯级别的，用分析纯加旋转蒸发仪重蒸2次可以嘛？我看资料说需要用传统的方法重蒸，不能用旋转蒸发仪重蒸，这个怎么办？？？请大家指点指点！

一般新柱子的柱效是最好的。6000做一般实验足够了。我觉得流速太大了，一般在1ml/min.建议：继续使用，不要强求柱效。降低流速，注意不要超过最大使用压力。

你做的样品可能是强保留，有些强保留组分，用强溶剂液冲不小来。
这几天保存柱子的时候，堵头没有堵好，柱子可能干了。或者放在仪器上的时候，有严重漏液，干了。这样的对柱子的损伤比较大。
用慢流速，慢慢的冲，用0.3ml/min，二氯甲烷试试。多冲几天！或者反冲一下柱子，不过时间不能长。
别急！

多谢楼上的兄弟指教，我想请问下：怎么知道柱子可能干了？用0.3ml/min，二氯甲烷冲洗柱子，会对柱子有很大的伤害吗？

更正一下：是一氯甲烷！！！正相拄用二氯甲烷。
用10%甲醇水溶液，乙腈，一氯甲烷（或氯仿）依次冲洗，再以相反顺序依次冲洗。柱子不会有大影响。

你的柱压是多少？如果柱压在正常范围，有缓慢升高是正常的，柱子本来就是消耗品。
如果柱压居高不下，说明有物质强保留，用乙腈长时间冲洗，没有改善的话就再生吧，我建议是用水、甲醇、乙腈、一氯甲烷或氯仿或异丙醇依次冲洗，再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相不含缓冲液，那么可以省略最后用水冲洗这一步。
一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质，在甲醇（乙腈）冲洗时重复注射100~200µl四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。
此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。
根据你之前进的样品选择冲洗的溶剂吧。
一般柱子还能用的话就不反冲柱子，反冲伤害柱子比较大

柱压变化不大，样品是从微生物中提取出来的。VISA兄能帮我看看适合用那种冲洗溶剂呢？

原因可能有以下几个方面：

1.柱子使用和保存条件不当。您使用柱子的条件是什么?是不是使用过程中流动相含水量过高?(含水量过高的流动相容易导致C18固定相的塌陷。)色谱柱使用过后最好用甲醇/水(10/90)冲洗色谱柱，除去柱内残留的酸或缓冲盐，然后再纯有机相中保存，特别是使用磷酸盐之后。

另外，使用中样品是不是“太脏”，大量物质死吸附在柱头，这种情况往往伴随着柱压升高。如果是这种情况，可以用异丙醇或者DMSO冲柱，实在冲不出来，可以把色谱柱反接，倒过来冲。分析纯的试剂也没太大的问题。

2. 柱效测量中的问题。检查仪器管路和色谱柱连接，看是否有明显死体积。

请按照出厂报告测试柱效，SB-C18是多大内径的?

怎么会用到2ml/min的流速呢?而且测试的温度应该是室温，30°有点高了，一般控制在23°。

希望我的回答会对你有帮助。

1. 这是色谱柱寿命的问题，色谱柱寿命比较复杂，影响因素很多，流动相组成和pH值、缓冲盐浓度、样品性质、复杂程度、溶剂的质量、色谱柱温度、使用方式等都可能影响色谱柱寿命。
2. SB系列色谱柱pH耐受范围1-8，实际最好在1-6，因此首先要看看你使用的流动相是否有高浓度缓冲盐、pH值是多少？高pH值流动相会导致SB C18寿命迅速下降。
3. 色谱柱使用后最好保存在甲醇或乙腈中，尤其是使用缓冲盐调pH值的场合，应将柱子清洗干净，最后保存在甲醇或乙腈中。如果直接保留在流动相里会伤害柱子。
4. 清洗方法，visa的就很全面了。
5. 色谱柱用完，应用柱堵及时封上2端，以防溶剂挥干。这样就不存在色谱柱干了的问题，而且不好确定色谱柱是否已经干了。
这些小细节都属于色谱柱维护的范畴。