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DMEM不一定含有谷胺酰胺!DMEM有很多不同的产品,有些含有谷胺酰胺,有些没有含谷胺酰胺,包括HEPES等一些添加物质,不同的产品是不一样的,你需要确认你的产品号,根据GIBCO或Hyclone的货号查阅。
关于缓冲液系统,你需要查阅你培养的细胞是否需要额外的缓冲系统,如HEPES等。
DMEM的配制方法,试剂的说明书上,GIBCO的目录上也有,你可以按照上面的要求来作。下面的是我配制粉剂培养基的方法。
1. 配制DMEM用的水要注意,最好用无热源的纯水,实在不用,用新鲜制备的三蒸水也可以;
2. 配制DMEM的时候,水温不要太高,袋子内碧要清洗干净,用约~800ml水。
3. 配制NaHCO3(GIBCO的好像是加入3.7g,注意至少应该是分析纯的,最好是搞一瓶新的,然后注明细胞培养专用),溶于~100ml左右的水中,再加入第2步的DMEM中。【也可以将NaHCO3直接与DMEM一起溶解】
4. 调节pH,有条件的最好通CO2气体进行调节,实在不行,也可以用HCl(0.1~1N的,注意,也要新的,标注上细胞培养专用,配制用水也一样是要严格的)【最好用pH剂调节,pH通常低于正常值的0.2~0.3,过滤后pH会上升至正常值】
5. 配制好后定容,并尽快过滤【推荐用正压滤器】
如果你只配1L,而你有没有大的正压滤器,那你只用用小滤器自己手动的滤了。滤完后,打一些空气看看滤膜是否破了,然后打开检查一下。滤后的培养基取一点作无菌测试。