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标题:[求助]DMEM的配制方法

whitesheep[使用道具]
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[求助]DMEM的配制方法



我是第一次配DMEM所以不是很清楚该注意些什么,要做哪些准备工作。乳鼠心肌细胞的培养,要配高糖的DMEM,是否加平衡液,那种?是否加谷胺酰胺?滤器要准备多少(1L)?在超净台上配吗?怎么调PH值?
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glass[使用道具]
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没有师兄可以请教吗?怎么问的都是最基本的东西。

谷胺酰胺已经包含在成品DMEM粉里了,不必多加。滤器用的是蔡氏滤器,注意滤纸的安装。配液及调pH都不必在超净台进行,pH调好后4度过夜再调一遍,这时可以进超净台过滤分装了。
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whitesheep[使用道具]
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那怎么调PH值呢?用ph试纸吗?
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ladyhuahua[使用道具]
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pH可以用pH计调啊,没有的话就用pH试纸。注意:要使用精密试纸,最好用两种不同显色的试纸。
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jrwyyplt[使用道具]
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DMEM不一定含有谷胺酰胺!DMEM有很多不同的产品,有些含有谷胺酰胺,有些没有含谷胺酰胺,包括HEPES等一些添加物质,不同的产品是不一样的,你需要确认你的产品号,根据GIBCO或Hyclone的货号查阅。

关于缓冲液系统,你需要查阅你培养的细胞是否需要额外的缓冲系统,如HEPES等。

DMEM的配制方法,试剂的说明书上,GIBCO的目录上也有,你可以按照上面的要求来作。下面的是我配制粉剂培养基的方法。
1. 配制DMEM用的水要注意,最好用无热源的纯水,实在不用,用新鲜制备的三蒸水也可以;
2. 配制DMEM的时候,水温不要太高,袋子内碧要清洗干净,用约~800ml水。
3. 配制NaHCO3(GIBCO的好像是加入3.7g,注意至少应该是分析纯的,最好是搞一瓶新的,然后注明细胞培养专用),溶于~100ml左右的水中,再加入第2步的DMEM中。【也可以将NaHCO3直接与DMEM一起溶解】
4. 调节pH,有条件的最好通CO2气体进行调节,实在不行,也可以用HCl(0.1~1N的,注意,也要新的,标注上细胞培养专用,配制用水也一样是要严格的)【最好用pH剂调节,pH通常低于正常值的0.2~0.3,过滤后pH会上升至正常值】
5. 配制好后定容,并尽快过滤【推荐用正压滤器】

如果你只配1L,而你有没有大的正压滤器,那你只用用小滤器自己手动的滤了。滤完后,打一些空气看看滤膜是否破了,然后打开检查一下。滤后的培养基取一点作无菌测试。
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whitesheep[使用道具]
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谢谢各位啦。
我准备了10个滤器希望够用。
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qqq111[使用道具]
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十个太多了
只要没破就可以用
只不过过滤的时候手搞的很痛
哈哈
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yes4[使用道具]
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你也可以用那种很大的滤器,我就是用的那种,一次可以滤很多L
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summerxx[使用道具]
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我们用大滤器 ,一次能过滤7升  没有问题,也不费劲,小滤器弄这个太浪费了吧?哈哈
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whitesheep[使用道具]
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今天早上手断了,呵呵。
如果可以的话能把你们使用的滤器型号和购买途径,对拉还有消毒方法都告诉我吧。用那个小滤器的确不是长远之计,先谢谢啦:)
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