[求助]关于培养基、血清的保存

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]关于培养基、血清的保存

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]关于培养基、血清的保存

49888[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2012-7-17 18:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看过一些资料，也问过一些老师，大家的方法都不一样

有以下版本，

配完全培养基时：

1、一次性把血清加进培养基配好、加双抗，调PH值，一起过滤，再分装

2、单配不完全培养基，加双抗，调PH，分装每瓶90ml，血清分装10ml，使用之前将血清加入培养基

3、单配不完全培养基，调PH，分装每瓶90ml，血清分装10ml，双抗配好分装，使用之前将血清、双抗加入培养基

这几种方案中得PH应该调到多少呢？看资料说过滤和冻存都会使PH变化，需不需要使用之前再次调整PH？

不知道各位大虾对这几种方案有些什么看法？

也请大虾门说说自己的经验和方法

请指点迷津呀。。。。

HP007[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 74166
精华 0
积分 446
帖子 612
信誉分 100
可用分 3833
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态离线

发表于 2012-7-17 18:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用方法3——单配不完全培养基，调PH，分装每瓶90ml，血清分装10ml，双抗配好分装，使用之前将血清、双抗加入培养基
培养基过滤灭菌后，PH会改变，升高0.1到0.2，所以过滤前调PH要比想要的降低0.2
放冰箱里时间长了会变碱，有些细胞要紧有些则没有影响，可以拧松瓶盖放CO2培养箱里一段时间，会恢复的

yueban-1147[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75776
精华 0
积分 692
帖子 1064
信誉分 100
可用分 6113
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-27
状态离线

发表于 2012-7-17 18:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

虽然我是新手,不过看了细胞培养的书后,还是同意楼上的方法,其实,血清也可以在培养基过滤完后就加入,因为完全培养基在4度冰箱里面可以保存6个月.
我的方法就是培养基和血清都分别分装,放入-20度,需要的时候、就拿出一瓶现配.双抗一般是用钱加.但是双抗一般对细胞有毒性,一旦加入后,以后每次都要加,不然细胞就挂了.所以,能够不加,最好不加,除非无菌手法很差,或者非常珍贵的细胞,个人愚见,希望赐教

tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态离线

发表于 2012-7-17 18:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

同意楼上两位，使用之前不用再次调整PH

caihong[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态离线

发表于 2012-7-17 18:02 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们配好的培养基在4度冰箱里面放上一周后出现白色的沉淀，这种现象正常么，应该如何处理？

wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态离线

发表于 2012-7-17 18:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能是血清的沉淀，也可能是污染，培养液浑浊吗？摇个菌看看

49888[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2012-7-17 18:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做个无菌实验:取10ml培养液于离心管或者25ml培养瓶,放置培养箱中24-48h,看是否有絮状物

one[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 73393
精华 0
积分 697
帖子 1114
信誉分 100
可用分 6353
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态离线

发表于 2012-7-17 18:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们的培养基滤完后是放在４度的，基本上一个月就用完了，血清是放在负二十度保存的，用的时候现用现加．如果把血清和培养基混合在一起时间长的话会有沉淀．

S6044[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75117
精华 0
积分 559
帖子 797
信誉分 100
可用分 4821
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态离线

发表于 2012-7-17 18:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的培养基加双抗，调PH值7.0，配好后，正压过滤，90ml瓶装，-20保存，。血清10ml分装保存于-20度。要用的话再放在4度解冻，超净台上再对对Ph值，将它调到7.4。一般配好一次（1L），可以用到20多天。

我看保存时间比较长（>2～3月）的培养基，下层是偏黄色，上层带点桃红的，解冻后呈透红色，给予细胞培养后很快变黄，初还以为细胞污染了，后发现整体培养基澄清，细胞生长良好。而新鲜培养基短期内呈桃红色，给予相近数目的细胞培养，颜色变化缓慢。所以我考虑是不是培养基保存时间过久，使酚酞指示剂的指示能力降低。

eric930[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79368
精华 0
积分 722
帖子 1061
信誉分 101
可用分 6148
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态离线

发表于 2012-7-17 18:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做实验是用第三种：单配不完全培养基，调PH，分装每瓶200ml，血清分装22ml，双抗配好分装，使用之前将血清、双抗加入培养基