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标题:[求助]谷氨酰胺的配制

superboy[使用道具]
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发表于 2012-7-19 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]谷氨酰胺的配制


我正在做大脑皮质神经元的培养，看了论坛里许多的帖子，提到培养基中需加入谷氨酰胺，神经元才会长得好，但也提到谷氨酰胺在培养基中4度条件下最多能维持2周的时间。
想请教，1.平时配1640或DMEM都是一次性地配1000ml，放在4度条件下，而一次实验不可能全部用完，那以后的实验，谷氨酰胺不是就已经失效了吗？这该怎么办呢？2.我们做培养用的是1640培养基，但大部分资料都用的DMEM，请问两者是否有区别？如若有，区别在哪儿？
希望大家赐教，不甚感激。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-7-19 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以把培养液分装成小瓶，应该不会1000ml装在一个瓶子中吧，我们做实验一般250ml/瓶。每次试验使用时用多少取多少，加入需要的附加成分。这样不用每次都操作1000ml。谷氨酰胺是粉剂的话可以先配成浓储液，-20度保存，如果买的就是溶液，那就分装好-20度保存。
1640与DMEM肯定是有区别的，如果你不是要测定1640与DMEM的作用，为什么不用多数资料推荐的培养液呢？
祝试验顺利。
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发表于 2012-7-19 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室的做法是：一包1640干粉配制成1000ml基本培养液，分装成500ml两瓶于-20度保存，使用时根据用量取相应体积配制完全培养基。配完全液时，若基本液已保存2周以上，配完全时就加一定量谷氨酰胺，使Gln终浓度为300mg/L。不过我们这是培养肿瘤细胞的，不知对神经元细胞适不适用，可以借鉴下呵呵！
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发表于 2012-7-19 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很感谢二位的意见，但我的困惑之处在于，每次配1640都是1000ml，而且是过滤保存的，那谷氨酰胺是与之一起过滤，还是另外过滤，需要时再加进去呢。
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toy[使用道具]
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发表于 2012-7-19 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的方法是将1640培养液分装为100ml，另外配制0.2mol/L的浓缩液过滤除菌，分装在小玻璃瓶中2~3ml，-20℃保存。用时在100ml 1640培养液中加入1ml，使终浓度为0.002mol/L。
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发表于 2012-7-19 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谷氨酰胺在37度条件下三天降解一半般,4度条件下一周降解一半,是很容易降解的,所以为了保证谷氨酰胺浓度,除了在配培养液时加谷氨酰胺外,可用PBS或相应培养基配10乘的,过滤,1ml分装,-20度保存,每周往培养液里加一支,呵呵,我就是这么干的
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-7-19 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Gln一般应单独配制,除菌过滤后-20度保存,用前化冻据需要量添加进培养液里
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发表于 2012-7-19 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般培养液中谷氨酰胺的含量为1～4mmol/L。可以配制200mmol/L谷氨酰胺液贮存，用时加入培养液。配制方法为，谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液，充分搅拌溶解后，过滤除菌，分装小瓶（5mlX20瓶），-20℃保存，使用时可向100ml培养液中加入1ml谷氨酰胺溶液。
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superboy[使用道具]
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发表于 2012-7-19 17:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很感谢大家的宝贵意见，那如果是1640，它本身就含有Gln，还需要另外加吗？
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ha111[使用道具]
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 小中大

如果培养液本身有，但4度放置超过两周，就要重加谷氨酰胺。另外可能还要调PH值。
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