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标题:[求助]请问这个是什么污染，是支原体污染么？

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发表于 2012-7-22 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请问这个是什么污染，是支原体污染么？



乳腺癌肿瘤细胞系MCF7培养一段时间，逐渐出现越来越多的如同砂粒的污染物，光镜下观察，在细胞膜和内部，特别是细胞核的位置，在培养基和培养容器的底部也有。这些东西不自己游动。换液后减轻，但不久就又变多。培养基不浑浊，但容易变黄。细胞不死但生长逐渐缓慢，但是生长随着沙砾状黑点的增多而减慢，黑点可粘附于培养瓶底部，此部分细胞不能贴壁。我怀疑是支原体污染，作了DAPI荧光染色，也有核上和核外的小点状荧光染色，但是与光镜下的砂粒状小点不完全重合，而且光镜下的沙砾状小点比荧光染色的蓝色小点要多的多。
不知道这个是什么东东，是什么污染，请各位指教！
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发表于 2012-7-22 13:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
光镜照片，镜头不是和清楚，凑活这看吧，呵呵。
应该能看到肿瘤细胞的大致轮廓，细胞表面已经被沙砾状小点几乎完全覆盖。


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发表于 2012-7-22 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同一视野下的DAPI荧光照片。


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发表于 2012-7-22 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

光镜加荧光重合图片。


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发表于 2012-7-22 14:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再来一张。


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 小中大

再来一张。


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发表于 2012-7-22 14:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

放大图，仔细看，细胞核上也有。


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发表于 2012-7-22 14:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我染色的时候洗了多遍，那些蓝色的荧光小点儿是DAPI没有洗干净造成的可能性很小。


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发表于 2012-7-22 14:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也经常遇见这种情况，我就当它是支原体污染。重新复苏细胞，培养液中加Plasmocin后就不会再出现这种情况，所以我觉得这应该是支原体污染。
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发表于 2012-7-22 14:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道别的战友有没有见过这种情况？
我怀疑是血清的问题，因为有观点认为血清不用灭活，所以没有灭。我用的是国产血清（中国医学科学院天津血研所）
细胞已经扔掉，准备灭活血清或者换国外血清重新配制培养基，重新复苏细胞。孵箱用新洁尔灭擦洗。培养用玻璃器皿重新消毒。
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