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标题:[求助]细胞冻存时能不能由-20度直接进液氮

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发表于 2012-7-22 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞冻存时能不能由-20度直接进液氮



今天冻存的时候，从-20度取出细胞后，直接就放到液氮罐里了
不知道这样会不会有影响~~~~~~~
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toy[使用道具]
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发表于 2012-7-22 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该不行。
细胞在-20度--60度，是危险区，应该缓慢降温，保持1度/分钟

建议重新冻存。
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ffooll[使用道具]
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发表于 2012-7-22 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

复苏后看看好了。不过没有负80度冰箱，可以先放入液N2罐液面上面，隔几分钟下降几厘米，慢慢往下降，直到最后全部浸没。
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2012-7-22 14:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

由-20度直接进液氮,细胞受损伤比较大,解冻后又很多细胞复苏的, 称活率还行!!!------这是我得切身体验,
到现在半年了,我们实验室半年前-80突然坏了,启动不了,老板总是没修,我也没办法就直接由-20度进液氮, 后来解冻的,还可以!
我用的是K562,megz01,A549细胞,其中A549死的较多! 其他两种还好!
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idea2011[使用道具]
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发表于 2012-7-22 14:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我感觉损伤还是很大的,我这样冻的细胞基本上不贴壁
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-7-22 14:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，看你真的很急。其实不用这么着急的，大不了重新冻好了。

你问的问题属于那种有大多数人都遵循的好的经验（冻存时慢速降温，化冻时快速升温），但是大多数人不知道为什么的问题类型。建议你自己查查文献，成了专家，然后来教教大家。呵呵。
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发表于 2012-7-22 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我复苏一种细胞贴壁不好，可能就是因为这个原因。
我觉得不行，应该在-80呆上一天，当然几天也没什么问题。细胞在-20度--60度，是危险区，应该缓慢降温
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-7-22 14:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

本人近期一直在这样尝试，因为实验室本来就没有-70的冰箱
美国回来的朋友也说这样没有什么，做就是了，所以才尝试

实际体验：我用bgc823，bel7402，还有mda乳腺癌编号不记得了（我不用）几种细胞实验过了。
血清DMSO9：1加细胞进冻存管，要高浓度！4度放半小时，-20放2小时—过夜都可以，直接进入液氮。

复苏时7402的没有问题，bgc成活状态稍差，乳腺癌细胞比较脆弱要求要和东村前的培养液状态一致才生长。

所以个人认为不同的细胞对冻存的要求还是不一样的！实践是解决问题的唯一办法！
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发表于 2012-7-22 14:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那细胞直接从那种家用冰箱的冰冻室放到负70度，会不会出问题？
本来是需要放在负20度再转入负70度的，结果放在了家用冰箱的冰冻室里边，不知道为什么居然没有冻上，难道是温度虽然是零下但是没有负20那么低所以加了DMSO的血清无法冻结？后来被我转到负70度去了，一会就冻上了，再取出来放回也不现实了，不知道会不会有什么问题。
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Ao7[使用道具]
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 小中大

唉，听大家这样一说，看来这批冻存的细胞是没戏了，只好找个时间复苏看一看了
多谢各位的指点
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