[求助]冻存细胞的DMSO浓度

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标题:[求助]冻存细胞的DMSO浓度

四福晋[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问冻存细胞的DMSO的浓度应该是多少？

969[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞冻存液含DMSO10%

yes4[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用的一般是6%，浓度太高会对细胞有损伤的。

wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

转载（忘记出处了）
 主要材料
（1）仪器设备：普通冰箱、-300C低温冰箱和-700C～-800C超低温冰箱、液氮冻存罐、高速离心机、电子计算机程控降温仪等；
（2）冻存管：容量为1ml或1.5ml；
（3）冷冻保护液：一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份DMSO混合而成。现配现用，或配制后防入普通冰箱冰盒内冷冻保存。使用前，于室温下水浴溶解；
（4）待冻存细胞：各种肿瘤细胞或杂交瘤细胞。
 操作过程
1. 待冻存细胞悬液的制备
(1) 按常规方法消化处于对数生长期的细胞培养物，制备单细胞悬液，并计算细胞总数；
(2) 将细胞悬液以800～1000r/min离心5min，去上清夜；
(3) 向细胞沉淀物中加入冷冻保护液，轻轻吹打混匀，使细胞密度达1×106～1×107个/ml；
(4) 按每管1～1.5ml的量分装于冻存管内，拧紧管盖；
(5) 再冻存管上做好标记，包括细胞代号及冻存日期。
2. 分级冷冻
(1) 先将冻存管放入普通冰箱冷藏室（4～80C），约40min；
(2) 接着将冻存管置于普通冰箱冷冻室（-100C～-200C），约30～60min；
(3) 将冻存管转入低温冰箱（-300C），放置30min左右；
(4) 然后将冻存管转移到超低温冰箱（-700C～-800C），过夜；
(5) 最后将冻存管投入液氮保存。
3. 记录
做好冻存记录。记录内容包括冻存日期、细胞代号、冻存管数、冻存过程中降温的情况、冻存位置以及操作人员。
 冻存结果
如此冻存的细胞，其存活率可达90%以上。
 讨论
在使用DMSO前，不要对其进行高压灭菌，因其本身就有灭菌作用。高压灭菌反而会破坏其分子结构，以致降低冷冻保护效果。在常温下，DMSO对人体有毒，故在配制时最好带手套。
在将细胞冻存管投入液氮时，动作要小心、轻巧，以免液氮从液氮罐内溅出。若液氮溅出，可能对皮肤造成冻伤。操作过程中最好带防冻手套、面罩、工作衣或防冻鞋。
应注意控制冻存细胞的质量。既要在冻存前保障细胞具有高活力，还要确保无微生物污染，这样的细胞才具有冻存价值。另外，在每批细胞冻存一段时间后，要复苏1～2管，以观察其活力以及是否受到微生物的污染。
冻存管宜采用塑料冻存管，不宜使用玻璃安瓿。因为在复苏时，需要从-1960C的液氮中取出冻存管，立即投入37～400C温水中，温差很大，玻璃安瓿瓶容易爆炸而发生危险。

四福晋[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢，我们是用10％DMSO加90％小牛血清。

skytree[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那我配药时DMSO浓度要求用0.01％，请问应该用什么液体稀释DMSO？

kswl870[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用培养基稀释就可以

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们是用10％的DMSO加20％的胎牛血清

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发表于 2012-7-22 19:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们实验室都是用的用10％的DMSO加20％的血清

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我对冻存细胞的DMSO的浓度的一点看法：
大家脑子里习惯认识是DMSO的浓度是10%，其实细胞系不同DMSO的浓度就不同，可以查ATCC网站里关于具体细胞系的冻存配方，下面是我查到的关于HTB-94细胞的冻存配方，起到抛砖引玉作用。
Preservation: Freeze medium: Complete growth medium, 95%; DMSO, 5%
Storage temperature: liquid nitrogen vapor temperature

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