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标题:[求助]细胞冻存的影响因素？

xevin[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞冻存的影响因素？



看了很多关于细胞冻存的资料，不过程序都不是十分统一，因此想知道冻存过程中哪个因素起到决定性作用。
这里还劳烦各位高手指点指点，你们在冻存时的基本程序如何？
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831226[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想除了细胞本身的状态问题的话，应该算是温度起到一个决定性的作用了吧，要遵循所有细胞培养书上说的“慢冻快融”的原则，使细胞内的水分尽量的不形成小冰晶造成对细胞的损害。我们的通常做法是：4度30分钟，-20度1个小时左右，然后是-80保存（不超过一个半月，一边养细胞一边不停的冻存）；也有同学省略了-20度这个程序，直接从4度到-80度，效果也还不错。当然如果有液氮保存最好。最后还可能影响到冻存细胞的就有可能是冻存液的配制了。个人的理解，还请高手指点。
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第一，细胞状态必须好
第二，严格遵守冻存的操作过程，即4度一小时，-20度一小时，再转到-70度
第三，细胞在-70度中保存时间一般不能超过半年，细胞品种及生命力不同能在-70度中能保持活力的时间也不同。

冻存液配方有两种，一种是含20%血清10%DMSO的培养基，另一种是90%血清10%DMSO，我两种都用过，后者效果比较好。

另外，个人觉得对冻存影响最大的还是细胞本身的状态。
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发表于 2012-7-22 19:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DMSO在常温下对细胞的毒性较大，如果大量的冻存细胞，需要将冻存液在4度下放置40－60min左右。
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发表于 2012-7-22 19:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻存中的关键问题在于减少细胞的冰晶的形成，一般细胞的冰点不低于－10度，DMSO的冰点在－18.45度，所以关键的步骤在于4度和－20度的时间控制，个人认为这两个温度是不能省略的，而且时间要严格控制。
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发表于 2012-7-22 19:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

弄个冻存盒,可以直接从常温到-80度,然后大于4小时后就可以放入液氮了,可以长时间保存,几年没问题的
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flower-201[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为最重要的是温度上的控制。
曾经有次冻细胞，在-20度放了一个晚上（12h），结果那批细胞复苏得很不好。要是有条件的话，买个冻存盒是个很不错的选择。
其次就是楼上说的细胞状态了，当然大家一般都会注意到这点。我个人喜欢在密度80%左右时冻，请各位高手指点。
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avi317[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻存盒啊冻存盒，好东西，省时省力，呵呵
冻的细胞绝对没问题
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-7-22 19:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、选择长势良好的细胞，密度在85－95左右，冻存前24小时换液！！
2、0－-20是关键的地方，楼上有比较详细的解释。我们采用的方法是4度30m，-20度1h，-70－-80过夜（12小时左右），最后浸入液氮中长期保存。有-80冰箱的话程序冻存盒很好用的啊，省时省力不操心啊！
3、曾经做过4度直接液氮！效果一般！
4、细胞内的成分有可能影响细胞的冻存，细胞内脂肪含量是一个比较厉害的因素，含量越高冻存效果越差，冻存过程就应该更小心。
5、关于冻存液：我们用的是10%DMSO，20%血清，70%培养基制成，使用前现配。不过要注意的是室温的DMSO对细胞损伤大，一定要保证冻存液与细胞接触后的最少4度的低温。
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owanaka[使用道具]
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 小中大
不知各位所说的冻存盒是什么样子的？
网上查到的就是普通的盒子，如何完成从常温到-80度的过程呢？
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