细胞世界

楼主说两次种的细胞数量不同，引起了存活率的明显改变。
我估计楼主说的应该不是OD值的差别，这个自然是细胞种的多，OD值会高点的，说的应该是药物对细胞增殖抑制率的不同，或者说是药物针对这个细胞的IC50值变了。后者低于前者。
理论上讲，细胞接种数量的不同是不会引起IC50的变化的。至于你说的出现了变化，考虑：
1、两次细胞状态不同，或者接种后处理不同，比如说同步化的时间不太一致；
2、细胞接种少了，或者多了；就是说前者或者后者的细胞数量接种不合适：有时候细胞种多了，到了特定检测点的时候，阴性对照孔的细胞已经严重长满了；接少了，对于某些细胞，特别是上皮细胞，生长有影响的；
3、干预时间不合适，道理同上。
感觉要让实验结果尽可能一致，对照组的细胞的状态不能受到干扰因素的影响（除了药物之外的）
见笑见笑！说的不对，不要拍砖！

第一次24,48,72,96小时分别是0.204，0.25，0.397，0.511，第二次是0.273,0.328,0.552,0.673，刚开始细胞比较少所以OD值低啊

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闹了半天，楼主说得是OD值不同啊，晕倒。细胞种的多了，自然OD值就高了啊。而且很多肿瘤细胞的倍增时间很短的，呵呵，感觉这个好理解的。

我每次种板后24小时加药是这样作的：事先将药物配成我所需的浓度也就是需要测定的终浓度，然后将孔中的培养基全部吸出，每孔加入180微升用培养基配好的药，这样可以吗？

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是啊，就是这样加的。恭喜。