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标题:[求助]过氧化氢的浓度和作用时间？

wsll[使用道具]
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发表于 2012-7-24 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]过氧化氢的浓度和作用时间？



我用的是30％国产过氧化氢，我直接用30％的加到已接种细胞的96孔板中，用培养液稀释，终浓度为200umol/L。加入过氧化氢时含10％FBS的M199培养液马上从粉红变为淡棕色，12个小时后镜下观察，细胞已经全部死光。请问是不是浓度和作用时间出了问题？
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bohe221[使用道具]
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发表于 2012-7-24 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在做过氧化氢的相关实验，用的也是30％国产过氧化氢，可能是国产的在某些成分上与老外的不同，做了几次发现作用时间不能太长，浓度不能跟老外的一样用那么高，可适当调整浓度和作用时间。你所用的浓度和作用时间不能照搬文献，应该是你自己做预实验探索出来的。
楼主是用的什么细胞？
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-7-24 10:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在做这个实验,问题非常多,30％国产过氧化氢还要注意批次,最好是新近的，我 做SH-sy5y细胞,用200UM,作用18小时,但是重复性不好,在96孔板中这个浓度还行,到了10cmdish,晕,一点都没有损伤,我都傻了。就算是都在96孔板中,都用一样的浓度,出来的结果也有相差,可能跟细胞的状态有关.希望战友们一起探讨,我都快晕了。
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发表于 2012-7-24 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不会吧，竟然效果是如此的不一致。我做的细胞是内皮祖细胞，12小时细胞早死的不像样子了，我是直接加30％到96孔板中，这样是否有不妥，是否先稀释一些。
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wsll[使用道具]
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发表于 2012-7-24 10:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看来我是要去购买sigma的过氧化氢了，好贵啊
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大尾巴[使用道具]
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发表于 2012-7-24 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做得时候是先稀释。结果肯定是与细胞的状态有关的，另外要注意接种96孔板时，细胞悬液一定要均匀；换液要轻柔，不要损伤细胞。我用的PC12细胞，用国产的发现对细胞作用较短时间后损伤就很明显。我们也准备订购一瓶sigma的过氧化氢，但过氧化氢属于危险品，公司说根本就不能航空，郁闷！！
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发表于 2012-7-24 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看来我是要去购买sigma的过氧化氢了，，好贵啊

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过氧化氢溶液不稳定，买再贵的也没用，随时间延长浓度会下降的。
原则是：高浓度的比低浓度的稳定，尽量用新鲜的。
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-7-24 10:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在做这个实验,问题非常多,30％国产过氧化氢还要注意批次,最好是新近的，我 做SH-sy5y细胞,用200UM,作用18小时,但是重复性不好,在96孔板中这个浓度还行,到了10cmdish,晕,一点都没有损伤,我都傻了。就算是都在96孔板中,都用一样的浓度,出来的结果也有相差,可能跟细胞的状态有关.希望战友们一起探讨,我都快晕了。

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我用的也是SH-sy5y细胞，我用前把30%国产过氧化氢稀释成1500UM，然后分装。我用200UM过氧化氢作用2h时，细胞的损伤就达到一半。你作用18h的损伤率是多少啊？你是做药效吗？不知道细胞损伤率是多少才适合反映药效呢？
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-7-24 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是30％国产过氧化氢，我直接用30％的加到已接种细胞的96孔板中，用培养液稀释，终浓度为200umol/L。加入过氧化氢时含10％FBS的M199培养液马上从粉红变为淡棕色，12个小时后镜下观察，细胞已经全部死光。请问是不是浓度和作用时间出了问题？

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怎么可能直接用30％的加到已接种细胞的96孔板中，30％国产过氧化氢算出的浓度是8.823mol/L。请问你在每个孔中加入多少ul过氧化氢，多少ul培养基啊？
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2012-7-24 10:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
怎么可能直接用30％的加到已接种细胞的96孔板中，30％国产过氧化氢算出的浓度是8.823mol/L。请问你在每个孔中加入多少ul过氧化氢，多少ul培养基啊？

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他肯定是说错了，绝对不可能直接加的，肯定是稀释好加的。
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