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标题:[求助]有没有方法可以调控细胞内的钙离子浓度?

bohe221[使用道具]
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[求助]有没有方法可以调控细胞内的钙离子浓度?


我需要做一组对照,调节细胞内的钙或者镁离子的浓度,是往培养基里加这些离子还是有成熟的protocol?急需答案!
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utt0989[使用道具]
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用fluo-3做Ca的最大和最小荧光的时候,通常用的方法是加破膜剂如Triton,使得钙全部外流,或者加螯剂,如EDTA,测得最小值.
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idea2011[使用道具]
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调节浓度?上调or下调?可以加入专门的抑制剂。抑制细胞内的钙离子通道。
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bohe221[使用道具]
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我要一个正常的,一个上调的。
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bohe221[使用道具]
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而且细胞要存活,在活的情况下看细胞内GFP的亮度
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daod[使用道具]
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当细胞受到外界刺激的时候,常常先发生变化的就是细胞内的钙离子浓度。通常会由静息状态下的100 nM上升到约1mM,变化幅度高达10,000倍。其升高的来源主要包括:细胞内钙库的释放和细胞外钙的内流。

所以你的问题的解决方案的设计就要从这两个方面来考虑。

增加外钙内流:用特定的激动剂激活质膜钙通道(如果有电压门控钙通道,就可以增加胞外K+浓度)。具体用什么激动剂就取决于你所用的细胞类型和想激活什么样的钙通道了。SOCC的特定激动剂并不很明确,就可以暂不考虑。
至于增加膜通透又想保持细胞的活性,你可以考虑ionomycin或者digitonin。浓度依细胞不同有差别,我一般用过5um左右。tritonx100不行,加进去膜全破了。

增加内钙释放:如果你有细胞微操,可以向胞内注射IP3,直接导致内质网放钙。或者用内质网改泵的抑制剂Thapsgargin,通过一直内质网对胞浆钙的吸收而是胞内钙升高。

所以你的问题要问清楚。目前你的问题现在我只能给出这样的解释希望对你有用
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bohe221[使用道具]
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谢谢,我大概有点头绪了,有没有这方面的protocol?
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bohe221[使用道具]
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我也是很需要大家多多指点啊,请问ionomycin和digitonin是怎么用法,有没有介绍他们的网站?
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bohe221[使用道具]
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我发现只有ionomycin可以满足我的要求,它是SIGMA公司的,有点贵哦
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kswl870[使用道具]
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ionomycin和digitonin 应该都可以从sigma买来,大家可以去cuturl('www.sigmaaldrich.com')去查查。
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