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标题:[求助]我做的MTT结果太离谱了

memory[使用道具]
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[求助]我做的MTT结果太离谱了



希望各位高手指教一下,我最近作的MTT检测一种多肽药物的体外抗肿瘤活性,在低浓度的时候<50μg/ml,有很低的抑制率,20%左右。但是在加大浓度就出现了奇怪的现象,加药作用的时候用的是无血清1640培养基,作用48小时后随着浓度的增大,细胞的存活率增加,OD值明显增高!更奇怪的是作的平行的只加溶剂PBS的对照组也出现了相似的情况,这究竟是怎么回事?请问有站友遇见过这种情况吗?这应该怎么解释呢?难道PBS也能促进细胞生长?无血清培养基对细胞的生长有这么不利的影响吗?
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S6044[使用道具]
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你是根据数据来确定你细胞的成活率的吗?
假如药物本身和MTT反应呢?
我同事就碰到过,做出来数据刚好相反,结果是药物本身的因素。。。。。。
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memory[使用道具]
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谢谢楼上的群友,我在显微镜下看到的和最后测得的数据是一致的呀,只有培养液的细胞都快死光了,但随着药物浓度的加大细胞存活的数目是明显增加的。你说的这种情况倒是的确有可能。好,我试一试。谢谢
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盼盼[使用道具]
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应该是药物可以和MTT结合,所以浓度高OD值也就高.建议你做一排同样浓度的药物对照,然后减去此值,结果更为可信.
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cj_mondy[使用道具]
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药物可以和MTT结合或者说药物本身和MTT反应好像不能解释:
“更奇怪的是作的平行的只加溶剂PBS的对照组也出现了相似的情况,”以及“在低浓度的时候<50μg/ml,有很低的抑制率,20%左右。”吧?
感觉:
1、最可能的原因还是药物本身的问题:
有些药物就是低浓度抑制,高浓度反而促进增殖的;
还有的可能是你那个什么多肽药物的活性让你弄坏了,反复冻融?室温下时间放长了?没有分装?
2、楼主不同匹次实验所种细胞数不同,来解释OD值的不同,毕竟肉眼计数的,有时候相差很大的。但是你又说“我在显微镜下看到的和最后测得的数据是一致的呀,只有培养液的细胞都快死光了,但随着药物浓度的加大细胞存活的数目是明显增加的。”,好像不太好解释,呵呵,RPWT?
关注!
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memory[使用道具]
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我做的不同板子上种的细胞数都是一样的呀,在未加药物的空白组OD值是基本一致的。我也在想浓度的高低是否出现抑制与增值的差别呢?
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memory[使用道具]
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谢谢大家的参与和支持,我的药物是分装过的,没有经过反复冻融,但是就是为什么会出现实验中的情况呢?难道多肽都分解了供细胞生长用了?
cj_mondy 群友说:
有些药物就是低浓度抑制,高浓度反而促进增殖的
不知道能否提供一下这种药物的名称或相关的文章呢?不甚感激!
还有一种情况,就是无血清的1640培养液就不能维持细胞生长48小时以上?没与血清所以细胞都死了?
希望大家给与指导。
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同问:"无血清的1640培养液就不能维持细胞生长48小时以上?"
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tianmei001[使用道具]
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请问楼主所说的多肽类药物的溶解性如何,又是如何灭菌的?我做的药物是多糖和小肽交联而成的大分子聚合物,现对其灭菌方法十分困扰,它在水中及任何溶剂中都不溶,呈悬浮状,滤菌根本行不通,我试过了,全被截留在膜上,高压灭又怕多糖或肽失活,对其抑瘤作用大打折扣,请大家帮我想想对这种药物有没有什么好方法灭菌呢?
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memory[使用道具]
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我用的就是PBS呀,是可溶的,融了以后就滤就行了。分装-70度保存就行了。我又一种要是不溶于水的我用了DMSO,就行了,直接用细胞培养用的,在无菌台上配置就没有过滤,没出现污染的现象。我想你那个药应该也能溶于DMSO的吧,不然可以试一试用酒精,祝你好运。
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