细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]人子宫内膜原代培养

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]人子宫内膜原代培养

taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
1

发表于 2012-7-24 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]人子宫内膜原代培养



我现在做人子宫内膜原代培养，文献查的都是使用胶原酶，但我由于经济原因想看胰酶可以不可以，已经做了三次了，都不理想，细胞数很少，也没有收集到传说中滤网上面的上皮细胞。所以想请教各位高手，胰酶和胶原酶区别在哪儿，我的实验可不可以就用胰酶
顶部
milkdog[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79280
精华 0
积分 500
帖子 719
信誉分 100
可用分 4366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-9
状态 离线
2

发表于 2012-7-24 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

去年我做过动物主动脉内皮细胞原代培养，主要问题也是细胞数量少。
文献文主张使用胶原酶，我开始用的就是胶原酶，效果一般。
后来改用0.25％胰酶（含0.02％EDTA)消化活性不错，可以试试。
顶部
milkdog[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79280
精华 0
积分 500
帖子 719
信誉分 100
可用分 4366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-9
状态 离线
3

发表于 2012-7-24 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

获得细胞数量少可以考虑用一下办法：
1. 加大标本量
2. 稍微延长胰酶消化时间
3. 加了胰酶后，可以将其置于37C 孵箱内消化数分钟
顶部
taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
4

发表于 2012-7-24 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感觉胰酶的作用似乎要强些，文献报道的胰酶大都消化30分钟，胶原酶一般都的一个小时。但是两者在作用的特异性上有没有什么区别呢
顶部
nn255[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76746
精华 0
积分 652
帖子 1024
信誉分 100
可用分 5877
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
5

发表于 2012-7-24 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做牛子宫内膜细胞培养,用胰酶消化做了好几次都没做出来.现在基本改用组织块培养了,时间长点,但有保障.
顶部
taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
6

发表于 2012-7-24 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼上兄，你一般几天可以长出细胞，你是怎么在后期将基质细胞和上皮细胞分开的了，传代的时候进行差错贴壁是吗，你一般几小时的时候换液。
顶部
ququer787[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77499
精华 1
积分 469
帖子 553
信誉分 102
可用分 3661
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
7

发表于 2012-7-24 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我有个朋友在做这个细胞的原代，她是用胶原酶I消化1小时，30分钟时吹打一次，消化效果很好，培养的效果也不错，你可以试一下
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
8

发表于 2012-7-24 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是肿瘤组织的原代培养，用的是胶原酶2（3.5％）混合胰酶（0.5％）的消化液，37度消化2小时左右，当中10分钟摇一次，然后用10毫升吸管仔细吹打后离心，能拿到不少细胞。希望能对你有所帮助。
顶部