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标题:[求助]流式三色荧光

bongte[使用道具]
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发表于 2012-7-24 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]流式三色荧光


实验要涉及到用三种带荧光的一抗标记细胞，然后上流式，前面已经买了分别带PE和带FITC的一抗，还缺最后一个，不知买带何种荧光的一抗好，园子里查了说PECY5可以，资料提示PE是呈橙色的，PECY5是呈红色的，而我亲自看别人用PE标记的看起来好像也是红色的，所以我担心这两种颜色不好区分，不知有哪位战友同时用过PE和PECY5这两种荧光，区别度又如何．除了PECY5还能选什么荧光，谢谢．
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-7-24 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
FITC 519 绿色 FL-1
PE 578 黄色 FL-2
选取第三种原则，Fl-3或其它通道检测，最好为深红色和蓝色，不需补偿。
如：Hydroxycoumarin(羟基香豆素)Aminocoumarin(氨基香豆素)等，但需要紫外激发。
再如您说的PECY5 488激发，670发射，当然可以，诸如此类PE-CY7，PerCP，APC（650/660,需六百三十多纳米的激光激发）。

因此您需要根据您那里的激光光源＆dector来选取荧光。

我想您的PE-FITC-PECY5应该可以。

您看到人家用PE标记是红色？用眼睛看到的？？嘻嘻。激光有害眼睛。而且PE经过激光打击后发出的光看起来更不舒服。最好不要在机器运行时打开光液工作室！
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bongte[使用道具]
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 小中大

我看的是别人的照片，他说得是PE标记了之后在显微镜下的照片．
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-7-24 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
颜色是根据光谱来定的！
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bongte[使用道具]
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 小中大
不知哪家公司卖CD133－PECY5的一抗，原来的那两个一抗都是BD公司买的的，但在BD公司却没找到CD133－PECY5．
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发表于 2012-7-24 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bongte 于 2012-7-24 16:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不知哪家公司卖CD133－PECY5的一抗，原来的那两个一抗都是BD公司买的的，但在BD公司却没找到CD133－PECY5．

这个还是朋友自己联系判断为好！
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发表于 2012-7-24 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再问一下思语版主，用PE-FITC-APC或PE-FITC-Biotin可以否？因为实在找不到CD133－PECY5．
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 小中大
FITC 519 绿色 FL-1
PE 578 黄色 FL-2
选取第三种原则，Fl-3或其它通道检测，最好为深红色和蓝色，不需补偿。
如：Hydroxycoumarin(羟基香豆素)Aminocoumarin(氨基香豆素)等，但需要紫外激发。
再如您说的PECY5 488激发，670发射，当然可以，诸如此类PE-CY7，PerCP，APC（650/660,需六百三十多纳米的激光激发）。

因此您需要根据您那里的激光光源＆dector来选取荧光。

我想您的PE-FITC-PECY5应该可以。

您看到人家用PE标记是红色？用眼睛看到的？？嘻嘻。激光有害眼睛。而且PE经过激光打击后发出的光看起来更不舒服。最好不要在机器运行时打开光液工作室！

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是不是说选择第三种荧光主要看激光光源，
但是使用带通滤片的流式COULTER XL型的机子能选择PECY5作为第三种荧光吗？还是说只能选ECD这样的
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zhenxin[使用道具]
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 小中大
是不是说选择第三种荧光主要看激光光源，
但是使用带通滤片的流式COULTER XL型的机子能选择PECY5作为第三种荧光吗？还是说只能选ECD这样的

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不是！
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 小中大

如果只用三色荧光染色上流式，我建议用FITC-PE-APC。 因为CY5 染色效果过于明亮，在四色荧光流式仪上它一般是第四选择。CY5的稀释倍数为3000-5000，如果必须要使用的话，一定注意不要浓度加大了。如果使用FITC-PE-APC，建议你最关心的两个指标的相互关系用FITC-PE，因为FITC-PE双轴图是最好的。
当然如果你很熟悉流式，FITC-PE-CY5组合没有任何问题，只是个人认为对于新手，FITC-PE-CY5似乎更难操作点。
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