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标题:[求助]亚克隆问题

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发表于 2012-7-24 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]亚克隆问题



我最近复苏了以前师姐做好的两株单抗杂交瘤细胞，两株已经是建株的，准备大量制备腹水的，但老板不放心让我重新亚克隆，我做了两次，结果都是一个细胞也不长，是不是我没有用饲养层细胞的原因啊？很着急啊，买的老鼠都已经到10周龄了，不知道会不会有问题啊？
谢谢了！
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发表于 2012-7-24 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天突然有个师兄问我，我有没有将两株细胞不小心混起来了，比如换液时，我内心一震，还真是害怕这样的事情出现啊，可是我应该没有这么不小心吧，不过还是心里发毛啊，好怀疑自己
请问假设我真的把两种细胞混了，会出现什么结果!我现在两株细胞都长的很好。真的好担心啊，为什么亚克隆做不出来啊，急死了。
如果大家有相似经历的，回贴吧，我等着
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发表于 2012-7-24 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做了两次，结果都是一个细胞也不长，是不是我没有用饲养层细胞的原因啊？

==============================================================================================

有这种可能性！细胞在密度很低的情况下，难以存活，需要加入适量的饲养细胞。另外，还可以提高血清的浓度试试。
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发表于 2012-7-24 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
买的老鼠都已经到10周龄了，不知道会不会有问题啊？

==============

不会有问题！
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发表于 2012-7-24 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
假设我真的把两种细胞混了，会出现什么结果？

================================================================================

细胞株不纯，自然不能获得单抗了，就叫多抗喽。如果真的混了，就需要亚克隆重新筛选了。
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发表于 2012-7-24 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
假设我真的把两种细胞混了，会出现什么结果？

=============================================================================

细胞株不纯，自然不能获得单抗了，就叫多抗喽。如果真的混了，就需要亚克隆重新筛选了。
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发表于 2012-7-24 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

“有这种可能性！细胞在密度很低的情况下，难以存活，需要加入适量的饲养细胞。另外，还可以提高血清的浓度试试。”

楼上提供的两种方法我都还没有试过，一定试试看啊，
但是建议提高血清浓度，我门用的是10%血清含量的生长液，但是最高允许提高多少呢？
我查下饲养层细胞是怎么取的。
我是要重新亚克隆的，至于筛选？我还真的不知道啊！
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发表于 2012-7-24 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

血清浓度可以提到15-20%，具体浓度自己摸一下了
筛选就是用当初建株时的方法就可以 了
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 小中大

哎，要是是我自己制备的单抗就好了。可惜不是的，我只是用别人制备的单抗来建立检测疾病的方法，因为才刚开始，所以很多东西都要自己慢慢学，经常被许多很小的问题困扰，不过能得到像你一样热心人的帮助，觉得很开心。真的！
我会继续努力的！谢谢！·
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 小中大

还有我想知道在做亚克隆的时候，有什么是需要特别注意的吗？
我今晚又做了一次。在记数后，我取的是平均值，103和83的平均，我折中成90，对不对啊？
还有我担心，细胞没有混匀，所以吹吸时很大力，不知道应不应该这样啊？
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