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发生了严重的溶血。所以导致了PBMC层不明显。从照片上只能隐约看到薄薄的一层。建议：1，尽可能新鲜分离PBMC；2，抽血的时候注意轻轻摇匀，使抗凝剂充分发挥作用；3，将稀释血液加入到分离液面的时候一定要慢；4，按照分离液与稀释血液1:1~1:2加入，可以适当增加分离液的量。我实验中常用此品牌的分离液，但是说明书似乎跟您的有点出入。我的是800×g离心，20分钟，如果血液放置超过2小时以上者，则离心时间增加至30分钟。多问一句：您分离的是人的PBMC还是动物的PBMC？我看您的说明书跟我的确实不一样，而且商品名也不一样，虽然密度是一样的，我用的分离液是Lymphoprep。我怀疑您用的是分离粒细胞的分离液。
