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标题:[求助]96孔培养板换液问题

owanaka[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]96孔培养板换液问题



我在96孔培养板上接种的细胞很均匀,但换液时,我用枪加150ul的培养基加入每个孔内,结果在显微镜下观察周边细胞全被冲到孔中央去了,而中间的细胞层叠成致密的团块.请问这样的细胞对实验有影响吗?有其他的好办法吗?
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一定要换液吗，96孔板？
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是3T3-L1前脂肪细胞,要进行诱导分化成成熟脂肪细胞.所以我每次换液总把握不好.请问有谁有这方面的经验吗?在此多谢了.
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Ao7[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室一般用机械吸引器吸引，吸引器管前面套一个20ul加样器的Tip头，效果不错，操作在无菌台内进行
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乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Tip头剪去尖端后灭菌使用，加液时液体呈滴状滴入，就不会扰动孔底的细胞了。
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

3T3-L1前脂肪细胞不是贴壁的吗？怎么会这么容易被冲到中间去？
我只听说过第一次把细胞加到孔中的时候很容易让细胞长得不均匀，3T3-L1前脂肪细胞要是贴壁了不容易被冲走了吧，要不然就不要用胰酶消化了，呵呵！！

建议：
加液的时候沿着边轻轻的加入，动作柔和，可以避免冲动细胞
去液的时候直接甩板，方便快捷
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

去液的时候不建议直接甩板，容易污染。
可以剪掉tip尖，
不能直接冲细胞，沿孔壁轻轻加入，
液体提前在孵箱里预热10分钟，有时候液体凉也会使细胞掉下来
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是换完液马上就卷了，还是过一会儿才卷的亚？我觉得这个细胞状态不好的时候是容易卷的，我诱导后换维持培养液时细胞卷的很厉害，原来也以为是换液造成的，后来观察了一下不是。你在仔细分析一下，一定是换液造成的马？一般帖壁细胞换液时即使是冲也只是一小部分破掉，不会大面积掉下来的，我认为
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

换完液马上就卷了,细胞好象是一大片全掉下来拉,并在浮动,然后我第二天在看时就发现细胞全堆在中间,我也没在意,继续换液.但现在是我把细胞从培养箱里拿出来肉眼就能看到每个孔中间有一个小白点.我以为是污染了,拿到显微镜下看又不太像,自己感觉是细胞叠在一起长的太密了.因为能看到很致密的细胞团.而周围的细胞轮廓很清晰,但不是很多.为这个实验我已经铺了5块96孔板了,真不想再这样继续盲目下去.
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天我又重新铺了一块扳子,我希望做过这个实验的XDJM们能给我一些实验操作细节的建议.蔽人在次叩谢了.对了,我做的是葡萄糖消耗实验
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