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标题:[求助]做流式的几个问题

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发表于 2012-7-25 11:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]做流式的几个问题



1. FL2-A和FL2-H和FL2-W中的A,H,W分别是什么意思啊?我只知道FL2的意思.........
2. SUB-G1是什么意思.什么情况下会有SUB-G1.
3. 药物处理导致凋亡, ＂将细胞收集并离心＂．请问怎么收集？　是不是先倒去培养液，ＰＢＳ洗２次，然后胰酶消化下来？那么这个过程中凋亡小体是否会随着洗脱丢失？
4．最后使用乙醇固定的时候是把乙醇逐滴加入细胞悬浮液中呢，还是把细胞悬浮液逐滴加入乙醇？有老师推荐后者，但是很多资料上写的都是前者啊？
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发表于 2012-7-25 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 kent 于 2012-7-25 11:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

关于流式基本知识，为什么不到
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=5526670&sty=1&tpg=1&age=0')
去看看呢？

很多问题搜索可以得到结果！

看过至少3遍了. 还是不明白, 所以才来提问的.希望不要见怪.
另外还想问下, 同时用PI和HOCHEST对已经乙醇固定了的细胞染色, 具体步骤是什么?
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发表于 2012-7-25 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

SUB-G1是什么意思.什么情况下会有SUB-G1?
晚晚期凋亡的检测——DNA含量分析法（亚G0/1峰分析）
原理：凋亡细胞DNA被降解，小分子DNA可以经通透细胞膜逸
出细胞外，凋亡小体可带走一部分DNA，因而凋亡细
胞DNA含量下降，导致DNA染料染色荧光强度降低，
在G0/1峰前出现亚G0/1峰
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发表于 2012-7-25 11:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
"药物处理导致凋亡, ＂将细胞收集并离心＂．请问怎么收集？　是不是先倒去培养液，ＰＢＳ洗２次，然后胰酶消化下来？那么这个过程中凋亡小体是否会随着洗脱丢失？"

凋亡小体丢失又不影响你的流式检测!

"最后使用乙醇固定的时候是把乙醇逐滴加入细胞悬浮液中"
我用的是这种方法,其实和做流式的老师联系好,根本就不用固定,我在他们的实验室养细胞,一收集好就交给他们,他们马上就测.主要是自己的时间控制好方便实验室的老师就好了，他们挺不错的！
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发表于 2012-7-25 11:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
"药物处理导致凋亡, ＂将细胞收集并离心＂．请问怎么收集？　是不是先倒去培养液，ＰＢＳ洗２次，然后胰酶消化下来？那么这个过程中凋亡小体是否会随着洗脱丢失？"

凋亡小体丢失又不影响你的流式检测!

"最后使用乙醇固定的时候是把乙醇逐滴加入细胞悬浮液中"
我用的是这种方法,其实和做流式的老师联系好,根本就不用固定,我在他们的实验室养细胞,一收集好就交给他们,他们马上就测.主要是自己的时间控制好方便实验室的老师就好了，他们挺不错的！

————————————————————————————————————————————————————

谢谢. 可是凋亡小体流失了,凋亡峰会不会变啊?
你们实验室的老师真好. 我们院的设备中心的管理员才懒, 恨不得叫我自己做. 反正摸索坏了她又不负责赔.........
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发表于 2012-7-25 11:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
SUB-G1是什么意思.什么情况下会有SUB-G1?
晚晚期凋亡的检测——DNA含量分析法（亚G0/1峰分析）
原理：凋亡细胞DNA被降解，小分子DNA可以经通透细胞膜逸
出细胞外，凋亡小体可带走一部分DNA，因而凋亡细
胞DNA含量下降，导致DNA染料染色荧光强度降低，
在G0/1峰前出现亚G0/1峰

————————————————————————————————————————————

谢谢! SUB-G1原来就是凋亡峰啊!
那就是说,单纯的PI染色只能区别出晚期凋亡和没有凋亡的细胞了? 早期凋亡就看不出了吗?
我现在是研究1种药物的凋亡机制. 请问还可以怎样做流式来得到更多信息呢?
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 小中大

3. 药物处理导致凋亡, ＂将细胞收集并离心＂．请问怎么收集？　是不是先倒去培养液，ＰＢＳ洗２次，然后胰酶消化下来？那么这个过程中凋亡小体是否会随着洗脱丢失？
4．最后使用乙醇固定的时候是把乙醇逐滴加入细胞悬浮液中呢，还是把细胞悬浮液逐滴加入乙醇？有老师推荐后者，但是很多资料上写的都是前者啊？
是的，消化下来终止，离心，弃上清，PBS洗1－2次，离心
混匀后，把乙醇逐滴加入细胞悬浮液中，细胞悬液中加70％乙醇固定2小时以上即可。要求要快速，沿管壁冲下。
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 小中大
谢谢! SUB-G1原来就是凋亡峰啊!
那就是说,单纯的PI染色只能区别出晚期凋亡和没有凋亡的细胞了? 早期凋亡就看不出了吗?
我现在是研究1种药物的凋亡机制. 请问还可以怎样做流式来得到更多信息呢?

————————————————————————————————————————————————————————————————

就象版主说的呀！PI是不能检测出早期凋亡的，它主要用于观察细胞周期的变化，原理上说它是检测晚晚期的凋亡，就是你的药物损伤了细胞的启动了细胞凋亡的通路，出现了如半胱氨酸蛋白酶3的升高、磷脂酰丝氨酸的外翻、线粒体膜电位的变化，DNA的断裂、凋亡小体的形成、死亡、
就是死亡前的这步才是PI能检测出的时间段，凋亡的时机很难掌握的，早了凋亡小体还没有出现，晚了细胞有死了。

不过、前面几种现象你都可以用流式做做、它们分别是测早早期、早期、早期、晚期的，有相应的试剂盒出售哦！
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 小中大
就象版主说的呀！PI是不能检测出早期凋亡的，它主要用于观察细胞周期的变化，原理上说它是检测晚晚期的凋亡，就是你的药物损伤了细胞的启动了细胞凋亡的通路，出现了如半胱氨酸蛋白酶3的升高、磷脂酰丝氨酸的外翻、线粒体膜电位的变化，DNA的断裂、凋亡小体的形成、死亡、
就是死亡前的这步才是PI能检测出的时间段，凋亡的时机很难掌握的，早了凋亡小体还没有出现，晚了细胞有死了。

不过、前面几种现象你都可以用流式做做、它们分别是测早早期、早期、早期、晚期的，有相应的试剂盒出售哦！

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谢谢了．那如果用ＡＮＮＥＸＩＮ－Ｖ－ＦＩＴＣ和ＰＩ双染是不是早早期、早期、早期、晚期都可以看到了啊？
顺便问下，乙醇固定后细胞膜产生了小孔，会使细胞液漏出是吗？那细胞核呢
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 小中大

不好意思, 还想问下FL2-A和FL2-H和FL2-W中的A,H,W分别是什么意思啊? 从斑竹给的连接中我只看出H是高度的意思, 而另外2个还是不懂. 再说"高度"又是指什么啊?
还有, 下面这张流式工作原理图, 里面SSC和FL1, FL2,FL3是从1条光路里来的, 到beam splitter才分开的．那么既然FL1, FL2,FL3分别表示不同波长的光的测量，　那么侧向角散射ＳＳＣ呢？它也是一种特定的波长吗？如果不是特定波长的话，显然就不可能通过beam splitter和FL1, FL2,FL3测量的光分开嘛．
bbcodeurl('http://www.gla.ac.uk/cancerpathology/experimental_haematology/graphics/facs/optical%20bench2.jpg', '%s')
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