[求助]关于明胶在细胞培养中的使用问题

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标题:[求助]关于明胶在细胞培养中的使用问题

月牙牙[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

搜索了一下关于明胶在细胞培养中的使用问题,还是有很多问题大家没有详细和标准的说明,现在有几个具体问题,请教各位战友,
1.明胶溶液配置的问题:用无菌PBS配还是用去离子水配?我们实验室有国产的明胶,很大一瓶的那种,能不能用于细胞培养?难道一定要用GIBCO 20ML即用型的?
2.明胶使用浓度的问题:有说0.1%,1%和2%的,我养的是内皮细胞,应该用哪种浓度呢?
3.明胶消毒的问题:有人说可以高温高压灭菌,有人说应该要过滤...还有人说要先高压再乘热过滤?不会吧,到底要怎样?晕啊~~~
4.明胶包被培养瓶的问题:有人说包被后置培养箱过夜,用时在弃溶掉的,加PBS和培养液冲洗..也有人说包被后吹干30min-60min .再加培养液冲洗即可用,到底怎么个做法啊
5.明胶包被后的培养瓶使用期的问题:包被后的培养瓶能够用多久呢?有文献说包被7天,干2-3天后放4度保存可以在两周内使用
以上是我的不解啊,望各位大侠指点!!!

月牙牙[使用道具]
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小中大

QUOTE:

原帖由 月牙牙 于 2012-7-25 11:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

搜索了一下关于明胶在细胞培养中的使用问题,还是有很多问题大家没有详细和标准的说明,现在有几个具体问题,请教各位战友,
1.明胶溶液配置的问题:用无菌PBS配还是用去离子水配?我们实验室有国产的明胶,很大一瓶的那 ...

Q1.明胶溶液配置的问题
A1: 用去離子水來配即可. 國產的行不行要去試驗, 保險的就是買進口的. 其實通常是買Sigma的gelatin粉末來配就好了, 不用買配好現成的. 配好的濃縮液可分裝放-20度長期保存, 即將要用的濃縮液可放4度來備用.

月牙牙[使用道具]
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发表于 2012-7-25 11:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

2.明胶使用浓度的问题:有说0.1%,1%和2%的,我养的是内皮细胞,应该用哪种浓度呢?

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Q2.明胶使用浓度的问题
A2:1%是濃縮母液的濃度, 使用前才取適量稀釋成0.1%來包被.

月牙牙[使用道具]
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小中大

3.明胶消毒的问题:有人说可以高温高压灭菌,有人说应该要过滤...还有人说要先高压再乘热过滤?不会吧,到底要怎样?晕啊~~~

——————————————————————————————————————

Q3.明胶消毒的问题:
A3: Gelatin是用高溫高壓殺菌的, 其他你所說的方法也不是不能用, 只是沒必要.

月牙牙[使用道具]
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小中大

4.明胶包被培养瓶的问题:有人说包被后置培养箱过夜,用时在弃溶掉的,加PBS和培养液冲洗..也有人说包被后吹干30min-60min .再加培养液冲洗即可用,到底怎么个做法啊

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Q4.明胶包被培养瓶的问题
A4:通常是包被1小時就夠了, 然後吸乾, 不需要清洗. 因為你配gelatin溶液中並沒有含其他有害的物質, 沖洗只是多了一道沒必要的工作. 包被完要清洗是Collagen才需要的.

月牙牙[使用道具]
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小中大

5.明胶包被后的培养瓶使用期的问题:包被后的培养瓶能够用多久呢?有文献说包被7天,干2-3天后放4度保存可以在两周内使用
以上是我的不解啊,望各位大侠指点!!!

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Q5.明胶包被后的培养瓶使用期的问题
A5.這個我不知道, 但基本上是越快使用越好. 由於包被的過程很快, 所以我都是當天包被, 在等的過程中可以去做其他的事, 包被即將完成的前20分鐘就開始處理細胞, 等細胞收下來包被也就做好了, 馬上就用.

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