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标题:[求助]培养基为什么总是慢慢变酸？

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发表于 2012-7-25 12:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]培养基为什么总是慢慢变酸？


我用的是1640，配好的1640母液4℃保存，用之前加入10％胎牛血清，再用NaHCO3调好PH。可是我发现：
1、冰箱中的1640母液一旦开封用过再放回冰箱，颜色就越来越黄（也就是说越来越酸）；
2、我配好的培养基，随着使用时间的增长，也是越来越酸。不知道是什么缘故？
刚才在坛子里看到大家都说应该偏碱，为何我却偏酸？说明一下，我从来不加热培养基，都是盖上两块布，放在培养室中，大环境和小环境都是长时间照紫外。
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发表于 2012-7-25 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

這該不會是污染了吧?
你說"盖上两块布"這是什麼意思呢?
如果培養液開封後操作不小心是會污染的,
但因為在冰箱的低溫之下細菌生長很慢,
所以不會馬上變黃而是緩慢變黃...
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发表于 2012-7-25 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵。我觉得污染的可能性大。
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发表于 2012-7-25 12:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为不想让培养基照到紫外，所以就盖上两块布。如果是污染，会是什么呢？培养细胞的时候，感觉细胞生长缓慢，但是培养基很快就会变黄。
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发表于 2012-7-25 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

发生这种事情已经几个月了。几个月来，我换了三个批号的1640，两个批号的进口胎牛血清（都是PAA的），碳酸氢钠重配了三次（对了，就是从偶碳酸氢钠用完重配开始出现这个事情的，难道是水里有支原体污染滤不掉？）。真是折腾死了，就好像没有希望毕业了。
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发表于 2012-7-25 12:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是1640，配好的1640母液4℃保存，用之前加入10％胎牛血清，再用NaHCO3调好PH。可是我发现：
1、冰箱中的1640母液一旦开封用过再放回冰箱，颜色就越来越黄（也就是说越来越酸）；
2、我配好的培养基，随着使用时间的增长，也是越来越酸。不知道是什么缘故？
刚才在坛子里看到大家都说应该偏碱，为何我却偏酸？说明一下，我从来不加热培养基，都是盖上两块布，放在培养室中，大环境和小环境都是长时间照紫外。
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这是培养基的特点，DMEM越来越碱，1640越来越酸。
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-7-25 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加了血清还调PH值吗,没试过,不会污染吗?
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发表于 2012-7-25 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加了血清还调PH值吗,没试过,不会污染吗?

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如果加血清后还调节PH，还需要多一步过滤的～
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发表于 2012-7-25 12:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果加血清后还调节PH，还需要多一步过滤的～

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谢谢大家！偶是加了血清调ph的，本来只用碳酸氢钠溶液，最近几个月发现水和血清都很酸，没办法，就加用了NaOH溶液，但是碳酸氢钠溶液和NaOH溶液都是过滤过的。
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发表于 2012-7-25 12:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的DMEM都是根据说明书配制的,先把培养液干粉与一定量的碳酸氢钠(固体试剂)再加入双抗加水混合后定溶,于4℃冰箱静止一晚上,第二天用G5滤器过滤后于-20℃冻存.
小牛血清买来的时候就是已经无菌的了,只是需要在56℃的条件下杀补体30分钟,然后开瓶,用小青瓶分装.用的时候用刻度试管配制10%牛血清的DMEM.(我的小牛血清是后加的).
我的DMEM配制完了以后也一点一点的变粉,但是不是很迅速,很缓慢.
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