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标题:[求助]请问你们培养DC是不是都先贴壁取单核细胞的.

daod[使用道具]
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发表于 2012-7-25 12:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请问你们培养DC是不是都先贴壁取单核细胞的.


请问你们培养DC是不是都先贴壁取单核细胞的,然后再加细胞因子的.
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-7-25 12:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
外周血诱导培养DC，可以通过免疫磁珠来分选单核细胞，然后加细胞因子诱导培养，或者用贴壁培养PBMC的方法获得贴壁的单核细胞，然后加细胞因子诱导培养。常用的细胞因子是GM-CSF/IL-4,TNF-a。是目前培养外周血单核细胞来源的DC的最常用的方法。
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发表于 2012-7-25 12:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DC分为两种来源的，髓源性和骨髓源性的培养方法是不同的。你是养什么的？
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 小中大

我养的是外周血的,我想问,我贴壁得到单核后,要不要重悬记数单核细胞加细胞因子,还是直接去掉淋巴后就加进去的.我每次贴壁的单核细胞拿来记数,总是很少,不知道有没什么诀窍
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-7-25 12:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

贴壁了的单核细胞是没法计数的了。只能大概数一下。而且贴壁的细胞不会很少，要注意使用合适的培养板。
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daod[使用道具]
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发表于 2012-7-25 12:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问要什么样的培养板比较好啊，我们用的是96孔的培养板，是不是太小了。
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daod[使用道具]
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发表于 2012-7-25 12:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有想问下，量是细胞因子的量怎么计算呢？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-7-25 12:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

96孔板太小了，不利用细胞贴壁！一般用6孔板，而且是适合贴壁细胞培养的那种，因为刚开始需要贴壁培养获得单核细胞。细胞因子的量GM-CSF 100ng/ml, IL-4 500U/ml。这个是根据Romani 1994年在Journal of medicine experiment 上面发表的文章报道的来做的。而细胞因子的浓度，特别是需要用到U为单位的时候，注意仔细看清楚试剂说明，里面有具体的细胞因子的效价！根据效价来确定需要用多少U每ML。
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发表于 2012-7-25 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，上面说的也太简单了，现在的文献培养DC的条件太多了，各不相同，不要说1994年的文献，我这2005年文献我也有啊，
养小鼠的DC，我光试培养条件就试了4个月，这里面包括看懂流式图，理解描述DC的一些词汇，还要几个月搞清楚T细胞增殖试验，总之这个试验没有基础做下来要至少一年。
养好小鼠的DC后再养大鼠的，以为手到擒来，谁知道又摸索了四个月，才少有感觉，呵呵呵，不容易啊！
最后，就是做这种试验不能考虑钱，
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daod[使用道具]
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发表于 2012-7-25 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能推荐一下好的培养板吗?
那我定的试剂2个微克是不是只能做没多少啊,只能配个20毫升,用起来真的好快呢.中间是不是还要换一次液,换液的时候有讲究吗?
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