细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]细胞为何老是消化后仍成团状?

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 27  1/3 123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]细胞为何老是消化后仍成团状?

u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
1

发表于 2012-7-25 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞为何老是消化后仍成团状?


最近培养MCF-7细胞,养的是不错的,就是每次消化传代时,总是不能把它消化成单细胞,而是较多细胞团,这样的结果往往就是培养平中某些区域长满细胞,而其它区域可能细胞较少,而且这个细胞贴壁后经常是成簇状生长,不知道哪位朋友对于这种难消化的细胞有何好的经验啊? 谢谢了!
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
2

发表于 2012-7-25 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化细胞后，等1分钟，成团状的细胞大多沉淀在培养瓶底部，此时轻轻吸取上面部分的细胞悬液，转入新的培养瓶培养。其余的可丢弃。
如果仍然成团状，则考虑是否是细胞有污染了。
顶部
tangxin_80[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79896
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4621
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
3

发表于 2012-7-25 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不要消化时间太长，细胞变圆，有少量细胞开始脱落的时候就终止消化，充分吹打，你看看怎么样，也可以把细胞养在培养皿上，不用吸管而是用枪来吹，你可以试试。我做过，比较有效。
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
4

发表于 2012-7-25 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
消化细胞后，等1分钟.是指什么意思呢?呵呵

————————————————————————————————————————————————————————————————

我感觉我这个细胞消化后不是很明显变圆,就是说感觉看起来不是很清爽(不像其它养的细胞那样消化后一个个细胞之间界限比较清楚),所以比较难以判断到底消化的杂样了,嘿嘿,你们说加点EDTA会好点吗?
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
5

发表于 2012-7-25 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞团接种后,对生长会有影响吗?
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
6

发表于 2012-7-25 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚才看了下细胞,发现培养瓶中有两种状态的细胞:1)某些区域比较典型呈梭状平铺贴壁;2)另外一些区域细胞没有典型形状,完全融合在一起,呈片状,似乎还有几层. 不知道第二种是不是因为细胞团生长的缘故呢?如果这样,在消化的时候,就比较难判断第二种情形下到底消化的怎么样了!!!!?
顶部
jrwyyplt[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79380
精华 1
积分 406
帖子 488
信誉分 102
可用分 3193
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
7

发表于 2012-7-25 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一般培养细胞都用EDTA的 0.02％ 效果蛮好的
你可以试试看
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
8

发表于 2012-7-25 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

刚才看了下细胞,发现培养瓶中有两种状态的细胞:1)某些区域比较典型呈梭状平铺贴壁;2)另外一些区域细胞没有典型形状,完全融合在一起,呈片状,似乎还有几层.

不知道第二种是不是因为细胞团生长的缘故呢?如果这样,在消化的时候,就比较难判断第二种情形下到底消化的怎么样了!!!!?
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
9

发表于 2012-7-25 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能是你在最初几次消化时没有彻底消化,培养后成团的细胞聚在一起多层生长,下一次消化时因细胞密度不均而更难消化完全.
可以延长时间充分消化一下,使细胞完全脱落,会有一定损失,但可避免这种"消化不完全-多层生长-消化更不完全"的恶性循环.
顶部
zranqi_1[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77471
精华 0
积分 409
帖子 497
信誉分 100
可用分 3298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
10

发表于 2012-7-25 13:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我正养MCF-7细胞，这种细胞就是这样，不像T47那样消化后变的很圆很亮（不知道这样形容是否合适），个人认为这与细胞本身的形态结构有关系。消化时间不用很长，否则对细胞会有损伤。
文献报道MCF-7细胞E钙粘素表达比较高，细胞之间的同质性黏附比较强，消化后细胞容易聚集成团状。我个人的经验是消化充分后，弃去胰酶加入新的培养基，充分吹打即可。
顶部
 27  1/3 123››