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标题:[求助]1%DMSO对细胞有毒性吗?

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发表于 2012-7-25 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]1%DMSO对细胞有毒性吗?



我养的是MCF-7细胞,接种于96孔板上,溶剂对照为DMSO,我是这样加药的:
用DMSO稀释药物到各浓度,然后每孔加198微升培养液,再加2微升DMSO稀释的各浓度药物,作用3天后,发现细胞基本上全死调了,难道是1%的DMSO有毒性吗?
有没有谁碰到过呢?谢谢!
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-7-25 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一、1%的DMSO在常温下是有毒性的，一般终浓度要在0.1%以下
另外你是稀释啥药物，促凋亡的药物浓度高了一样OVER

二、你完全可以把DMSO浓度降下来，为何非要用1%呢，这个浓度有毒性肯定是经过前辈们的实验证实的。

再看该贴 cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=6573673&sty=1&tpg=1&age=0')


--------------------------------------------------------------------------------
用DMSO配成母液，再用培养液稀释成所需浓度。一般是这样的，母液中雌二醇溶解了那就行了，因为量很少一般也不会因为稀释了而再析出来。但不排除会析出来

+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++

纯度大于等于99.7%,也没看到注明是否细胞培养级别!

呵呵,我最开始也是和你们一样,DMSO配成雌二醇母液(10-2M),然后用培养液稀释成各浓度(10-4到10-12M),但遗憾的是,各浓度雌激素雌二醇(本来是作为阳性对照的)均没有诱导雌激素敏感细胞(MCF-7细胞)增殖(即常见的MTT法)!!!!!!!!所以我才考虑是否在低浓度DMSO下,雌二醇没有完全溶解而析出来了!!!!所以才用DMSO来稀释雌二醇到各浓度,所以才发现1%DMSO有细胞毒性(表现为吸光度降低),所以才有我们这么多的讨论啊,呵呵!

所以我一直在找为什么没有诱导细胞增殖的原因,但还没有找到呢,呜呜呜...........

==================================

MTT法影响因素很多的，本身就不灵敏
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发表于 2012-7-25 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般来说，1%就是临界值，ＤＭＳＯ还有无水乙醇在这个浓度对细胞都是有较大毒性的，庆幸的是我以前的实验已经证明了这一点，可以考虑一下再溶解药品的时候两者混用，这样既有溶解效果，又可降低对细胞的毒性
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发表于 2012-7-25 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我配置的是雌二醇,在加入的时候,我只是把2微升直接加到198微升培养液中,但并没有吹打使之混匀,不知道要不要再吹打一下的?(会不会是因为这个原因而导致细胞毒性呢?)

如果1%DMSO对细胞有毒性,那么10%DMSO冻存后细胞复苏的话,不是细胞毒性更大吗?

还有一点忘提了,就是在试验中我也设置了这样一个对照:用培养液配置1%DMSO,结果是没有显示细胞毒性,这和2微升DMSO加到198微升培养液中得到的1%DMSO有什么不同吗?怎么结果会相差如此之大呢?

非常感谢啊!
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发表于 2012-7-25 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有混匀肯定是很有影响的啊
高浓度的DMSO你的细胞碰到就挂了...
按理说DMSO浓度都应该再0.1%以下。

不过对照没有事情的话....可能你的雌二醇有问题吧。

所以细胞复苏之后要快点离心去掉DMSO啊..
常温DMSO毒性是很大的，低温会好些
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发表于 2012-7-25 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用培养液配置1%DMSO,然后直接吸取200微升加入96孔板,结果是没有显示细胞毒性,这和2微升DMSO加到198微升培养液中得到的1%DMSO有什么不同吗?
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131415[使用道具]
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 小中大

谢谢楼上朋友,想再请问一个问题:我用DMSO配置雌二醇母液(10-2M),然后用DMSO稀释成各浓度,是这样配置的吗?我看到文献中有些是用培养液稀释的,如果那样的话,雌二醇是否有可能会没有完全溶解呢(因为DMSO不是100%的)?
谢谢啊!
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发表于 2012-7-25 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

10%DMSO在低温下对细胞有保护作用，而毒性几乎消失．
所以在复苏,回复常温后，冻存的细胞需要用培养基稀释后，离心下来，再放入培养瓶比较好．
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jujuba[使用道具]
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发表于 2012-7-25 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得很奇怪，我也在做药物作用，对于难溶的药物我也用的是DMSO，也试过只加DMSO来对照，1%是没有影响的。你再重复一次试试，是不是计算错误了？
另外，你为什么要在198微升的培养液中加2微升的药物呢？？这样可能出现的误差会比直接加200微升终浓度药物出现误差的机率大多少？可能会有很多倍吧。每孔加样的量越小，出现误差的机会越大。建议你在这个上面再改进一下。
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发表于 2012-7-25 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你说用DMSO配成母液，再用培养液稀释成所需浓度。一般是这样的.那么如果这样的话,所需浓度中DMSO的体积百分比不就不一样了吗?例如,DMSO配成
10-2M母液,然后用培养液依次稀释成10-4,10-5,10-6直到10-10M,那么10-4M中DMSO的体积百分比是1%,10-5M是0.1%,依次下去,如果96孔板每孔直接加入200微升各浓度的话,DMSO的体积百分比岂不是不一样吗?

你好!
你说这样可能出现的误差会比直接加200微升终浓度药物出现误差的机率大多少？可能会有很多倍吧。如果各浓度药物是用DMSO稀释的话,那么直接加200微升是不行的吧,这样的话DMSO的体积百分比岂不是100%了?! 如果是用培养液稀释药物到各浓度,那么又会出现我上面说的情况,那么到底该怎样做呢?
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