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标题:[求助]大鼠平滑肌细胞培养

guagua[使用道具]
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发表于 2012-7-25 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]大鼠平滑肌细胞培养



各位前辈：大家好！ 我目前刚开始做大鼠平滑肌细胞原代细胞培养，很多地方不是很明白！现在有两个问题向大家求教，欢迎各位前辈多多指点！
1、从大鼠体内取出主动脉后该如何处理？
我看文献有的说要剥离血管周围的结缔组织和外膜，结缔组织还好剥离但是在没有纤维器械的情况下怎么能剥离血管外膜呢？
2、接种组织块时究竟应该内膜面向上还是向下，还是都没有影响？

困惑的地方不少，还请大家给我点意见，让我能养成细胞！谢谢！
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发表于 2012-7-25 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养过，就个人经验和你探讨：
1、取大鼠胸主动脉，外膜用普通尖镊就可以剥下来的，仔细撕扯应该基本上是可以剥离的，难的是内膜的剥离，不过内膜的剥离与否对平滑肌的培养影响不大
2、我自己做的时候，没有去管面向上还是向下，用吸管摆放均匀就行了，细胞爬出出来的时候，有时会发现一些内皮混在其中，不过几次传代过后，由于平滑肌细胞的优势生长，就看不到任何内皮细胞了，平滑肌肌动蛋白染色都是阳性，所以我想向上还是向下应该是无所谓的
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guagua[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢！
血管外膜是指外面那一层很韧的透明的薄膜吗？分离的时候，好像对血管的牵拉很厉害，对以后的细胞培养是不是会有很大影响呢？
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.用两把眼科镊就可以把血管外膜剥离。
2.血管内膜的去除是这样的：先把血管剪成大约0.5厘米的小段，然后将血管条套在眼科镊上，用另一把眼科镊或者眼科剪转动血管使其内面在眼科镊上摩擦，因为大鼠的内皮比较容易去掉，所以经过摩擦血管的内皮就去掉了，

这样你就不用担心是哪一面贴壁了，因为只剩下中膜的平滑肌了。这样长出来的细胞基本都是平滑肌，很少内皮的。
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flower-201[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对血管的牵拉不会影响后续细胞的培养生长
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小荷尖尖[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

内膜可以用湿润的纱布擦去。
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dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用两把眼科镊就可以剥离外膜吗？你剥离的不会是外面的脂肪组织吧？
请详细说说怎么做的，一般剥离外膜的时候，很薄，一不小心就把整个血管弄破了，谢谢
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天刚做了原代培养，你们的组织块一般几天能爬出来平滑肌细胞呀？我怎么区别平滑肌和成纤维细胞呀？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我今天刚做了原代培养，你们的组织块一般几天能爬出来平滑肌细胞呀？我怎么区别平滑肌和成纤维细胞呀？

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大鼠的平滑肌细胞估计需要5~7天，与你采用的血清质量有关.需要做a-actin鉴定平滑肌和成纤维细胞，去除成纤维细胞的关键是完全剥离外膜。祝实验成功！
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guagua[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢多谢，觉得剥离的还是很干净的，就是今天剥离的时候有点儿用劲儿大了，不知道会不会影响细胞的活力，用的胎牛血清，是２０％的浓度，现在又担心血清浓度太高了会不会抑制细胞活力啊
担心中．．．．．
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