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标题:[求助]有关小鼠黑色素瘤细胞的问题

yysr238[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]有关小鼠黑色素瘤细胞的问题



最近要培养小鼠B16细胞，不知道应该注意那些问题？比如培养基的问题，用低糖的DMEM可以不？
还有我想把这种细胞接种到小鼠身上，不知道要接种多少才会种植成瘤？接种量的安全剂量是多少啊？谢谢各位战友
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是用1640加10%CS养B16的，养过一个月时间，生长状态还可以。个人感觉细胞贴壁较紧，必须加0.25%胰酶用点力吹打传代。DMEM低糖没用过，但我有段时间1640缺，临时用高糖DMEM替代了一天，感觉不好，细胞有变圆的趋势，赶紧又换了回去。
接种小鼠用10的6到7次方可以了，0.2ml。
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yysr238[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用0.25%胰酶消化的时候需要注意些什么呢?在这之前还需要用PBS清洗一下吗？大概要消化多长时间啊？是全贴壁的细胞还是半贴壁的细胞啊，需要用多大的转速离心啊？
有好多不明白的地方，希望各位战友不吝赐教！
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一定要清洗的，培养基中含血清的，不能直接注射。
选对数生长期的细胞接种动物。
B16成瘤率比较高，成瘤后生长的较快，看试验的需要选择正确的接种数。10的6到7次方个人感觉太高了。瘤体生长太快，C57小鼠很快就死了。
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yysr238[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

皮下注射有没有什么更好的办法啊?有什么好的技巧啊?
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yysr238[使用道具]
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发表于 2012-7-25 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用胰酶消化后直接把细胞分瓶可以不，不去除EDTA可以否？
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yysr238[使用道具]
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发表于 2012-7-25 17:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

10的6到7次方细胞／0.2ml吗？一个２５cm的塑料培养瓶长满的话可以有多少细胞啊？谢谢
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jujuba[使用道具]
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发表于 2012-7-25 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

皮下注射就是试验操作，没有什么技巧，熟能生巧。
EDTA含量低的话不去除也可以。
10的6到7次方细胞／0.2ml挺多的，还是看你的试验要求与安排。一个２５cm的塑料培养瓶长满最多也就2×10的6次方。
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yysr238[使用道具]
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发表于 2012-7-25 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在活的老鼠身上可以测量肿瘤的大小吗?需要用什么工具吗?游标卡尺可以不?有计算的公式吗?谢谢!
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-7-25 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用游标卡尺测量，计算公式是段径的平方×长径除以2
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