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标题:[求助]做MTT时,96孔板中每空的细胞数是多少啊?

woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]做MTT时,96孔板中每空的细胞数是多少啊?



请问做MTT时,96孔板中每孔的细胞数是多少啊???为了照相每次我都在加MTT前将扳子的培养液甩掉,照完相后加70微升的无血清培养液(为了节省)和20微升的MTT,不知道这样对结果有没有影响?
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本人实验时(平滑肌细胞)是以1×10*4/ml,200微升/孔接种,所以每孔至少2000个细胞,可以得出实验结果.
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am10[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不同的细胞，不同的药物作用时间或是影响因素，要求接种的细胞数会不同。一般是1000-10000个，看你的细胞的生长速度，体积大小，都会有影响的。我做的几个不同的肿瘤细胞系，多数种3000-5000个，药物作用48-72小时是可以的，细胞数太少，读数太低，误差会增大。细胞数太多，细胞长满了以后脱落，OD值和活细胞之间就不再是线性关系了，也会使结果失真。我们这里也有人种1000/孔，但我试过2500/孔，作用48小时，OD值就特别小了。MTT的影响因素太多了，还要自己好好摸索，愿你好运！
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any333[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般不要超过5000个/孔，少一点倒没什么，反正和对照组比较而已
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不同的细胞大小应该有差别啊，不过一般都是在1－3000/孔。
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加70微升的无血清培养液(为了节省)和20微升的MTT

————————————————————————————————

直接加终浓度的MTT就是了，为何还要培养液，加MTT后细胞就死了
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该考虑到你的细胞的情况，大小以及生长速度等，一般来说500-10000就可以，具体条件的自己摸索
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本人做的是L929，以1×10*5/ml,100微升/孔接种
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是MCF-7.做MTT时加100微升的细胞悬液和100微升用百分之十1640配成的药,我想培养48和72小时.如果每孔接种数目合适的话,正常细胞对照组的OD值应该是多少啊?
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-7-25 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

除此之外,还怎么能看出来每孔细胞接种的数目是合适的???新手,请指点!
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