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标题:[求助]悬浮细胞生长缓慢,部分抱团

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-7-26 12:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]悬浮细胞生长缓慢,部分抱团


新手上路！请问各位前辈：我养的是RPMI-8226细胞，是悬浮细胞，从外面购进后一直生长缓慢，之前在塑料培养瓶里培养，细胞部分抱团生长。后来听说玻璃培养瓶好，就换瓶了，结果从7月5号到7月10号细胞根本就没怎么长，还照样成团，还有一部分是悬浮存在。我的培养液是RPMI-1640+10%FBS+1%P-S ，跟别人的一样。每2-3天换液一次，至今未传代，采用离心换液的方法。
请问为什么我的细胞长这么慢？是否有污染的存在？还是有其他的原因？怎样处理？抱团生长是否是正常现象？谢谢各位了！
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-7-26 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是细菌污染的话,你的细胞早就死了.不必每次都离心换液,半量或1/3量换液就可以啦.你的细胞生长缓慢,估计还是培养基的问题,测一下你的PH值;FBS稍多加点,或许会长得快点.你的培养液,别人用过怎样?
8226细胞可以是抱团生长的,也可以黏附于培养瓶底,不用担心!
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发表于 2012-7-26 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果是污染了的话，你看培养液颜色就能够看出来，很浑浊的那种。
和楼上所说一样，我建议你用别人的rpmi 1640培养液试试看，如果细胞生长良好，那就是你自己的培养液的问题了。还有就是你的fbs质量怎么样，
因为有些朋友是用的小牛血清代替胎牛血清，国内的小牛血清质量不是很统一，各家公司不一样，建议你买知名公司产品。
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-7-26 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上两位,我决定购买新培养液和血清,并且把浓度换成15%FBS,看结果怎样.
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发表于 2012-7-26 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼上两位,我决定购买新培养液和血清,并且把浓度换成15%FBS,看结果怎样.

——————————————————————————————————————————————————————

不知现在你的细胞怎样了？我也在养悬浮细胞，MO7e,最近复苏的三瓶状态也不好，长的超慢，还有细胞碎片和黑点．
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-7-26 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我已经把ＦＢＳ换成１５％的浓度了，细胞长的一般，不过我觉的也不快．但是比前一阵要好些了，我听师姐说我的细胞比较娇气，所以要小心伺候着．另外，我原来有几次换液时，是静止去上清，我发现我的上清里也有好多细胞，所以换液时的细胞丢失也是我的细胞迟迟不愿意长的原因吧．这几次我都离心换液了，细胞丢失的明显少了，但是离心要记住选好速度和时间，否则会把细胞弄碎的．我是新手，就这点体会．不知你养细胞时有什么体会吗？
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发表于 2012-7-26 12:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的ＴＨＰ－１也是悬浮细胞，细胞出现抱团是很正常的，可能是处于分裂期，ＴＨＰ－１是比较好养的一类细胞，１０％的小牛血清就疯长．大约隔天就需要传代，我都是离心的，１５００ＲＰＭ５分钟，对细胞没有肉眼可见的损伤．静止几分钟就换液，损失的细胞就太多了，起码需要一小时，而且瓶口在酒精灯旁边消毒转动时下沉的细胞会再次上浮，直接弃上清细胞丢失很严重．鉴于培养细胞类型不同，你可以加大小牛血清的浓度，要是胎牛哪就更好了，细胞传代时也不可太稀，再看看你的细胞嗜酸还是碱
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-7-26 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

恩，我觉得我的细胞初始密度太小了，所以长的不快，我明天换液，想把两瓶的细胞放在一瓶里。我的离心速度是900rpm，5min。
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发表于 2012-7-26 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我换液时也都是离心的800-1000,5分钟. 静止去上清没做过.不过传代时不离心,直接分瓶稀释.今天看了细胞好象更差了5555
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发表于 2012-7-26 12:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞状态差的时候可以低速离心,600rpm 5min就可以了,但是不能每次换液都离心,这样对细胞的损害是比较大的,我们也养了8226细胞,应该是很好养的,我觉得主要还是培养基的问题,我们开始用胎牛血清养不好,换了新生牛的血清就好了,GIBCO的,生长的好的细胞,是每天都需要换液的
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