[求助]做MTT的试验药物不溶，怎么办？

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标题:[求助]做MTT的试验药物不溶，怎么办？

vcve[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我现在作一种药物的体外抗肿瘤活性试验，但拿到的药物不溶，该怎么办？我参考司徒振强的细胞培养中所介绍的，用的是生理盐水来配置储存液，但药物成了混浊的液体，再一过滤，药物都滤没了，还怎么确定浓度呢？我看到书中还介绍有用乙醇或者是DMSO来配置储存液，我想请教一下各位，具体的用法？有没有具体的适用范围？谢谢！

eric930[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可先以5％的乙醇或DMSO来溶解药物，然后再用空白MEM稀释至规定浓度。

vcve[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那么是不是每个浓度都需要加入同样体积分数的DMSO的培养液来的孔做为对照呢？能否告知呢？

eric930[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

母液用DMSO，以后再稀释不同浓度的药液就不用加DMSO了，只用空白MEM，越稀释药浓度越低，一般不会再沉淀了。

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

MEM是什么东西？不吝赐教，谢谢

wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1 可以用DMSO溶.
2 用DMSO溶完之后有几点注意的:
(1)DMSO对细胞有毒性作用,加药的时候尽量让DMSO的量小一点.有的文献说一般小于2%都影响不大,但我的经验是0.5%一般会有15-20%的死亡率.所以有必要设一个DMSO的对照,同时要求每个加每个药物的DMSO量应一致.这样可以消除DMSO的影响.
(2)用DMSO溶解的高浓度药物如果用培养液稀释后再加加药时,有时有结晶析出(原因不明),但如果用小剂量高浓度DMSO药液直接加则可避免.
(3)我做96孔板,用DMSO把每个药物配成终浓度的200倍,然后加加药时每孔加0.5ul(总体积100ul)或1ul(总体积200ul)

whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以用20%的酒精溶.我做20%酒精的阴性对照,结果证实20%酒精加入到细胞培养基中是完全不影响细胞活性的

49888[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1、取一定量（mg）药物溶于溶于一定容量的DMSO（ul）中获得0.1M 浓度的药物母液。
2、根据实验设计需要的总培养体积，取上诉0.1M 浓度的药物母液用1640稀释10倍得到10-4M终浓度的工作液；
3、取上诉10-4M浓度工作液用1640 稀释10倍得到10-5M终浓度的工作液；依次类推获得10-6，10-7，........的不同摩尔浓度的工作液。
采用DMSO溶解，其摩尔浓度应不超过0.2M，否则的话虽然药物可以溶解在DMSO中，但在向配制培养体系中加入时回再次析出、沉淀。这是配制类似物质用于体外细胞培养体系干预研究的诀窍！当然药物的最大使用浓度将会受限于最多达到10-4M。

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议你首先先用乙醇溶解试试，20% 的乙醇对细胞不会有什么影响，实在不行就试试DMSO，配置的药物浓度时乙醇的浓度可适当高一些，因为加药的时候还会有稀释，

vcve[使用道具]
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发表于 2012-7-27 10:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位的建议，我现在使用的是DMSO稀释成终浓度的100倍，再加入培养液依次稀释，稀释效果还可以，DMSO在终浓度的比例是小于1%的，应该不会对细胞产生影响的吧。

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