小中大[求助]免疫组化抗体稀释的问题
我的实验设计如下：
体外培养牛乳腺上皮细胞角蛋白18（Cytokeratin-18）的免疫组化鉴定
（1）将体外培养的乳腺上皮细胞传至35mm培养皿中，培养约3---5天；
（2）待细胞长至80%汇合单层时，倒掉培养液，用预冷的PBS冲洗细胞两次
（3）用冰浴的甲醇于4℃固定5分钟；
（4）用PBS冲洗细胞3次，每次5分钟，然后用干净滤纸擦掉边缘水分；
（5）滴加0.75%的过氧化氢PBS溶液，37℃温箱温育30分钟，以阻断内源过氧化氢酶；
（6）PBS冲洗三次，每次5分钟，然后擦干边缘水分；
（7）滴加5%正常猪血清，室温放置1小时；
（8）轻轻甩掉血清，将培养皿剪成两半，一半滴加角蛋白18抗体200ul（1：20稀释），一半加入PBS作为阴性对照，放于湿盒内37℃温育1小时；
（9）PBS冲洗三次，每次5分钟，然后擦干边缘水分；
（10）分别滴加羊抗鼠荧光二抗200ul（1：20稀释），放于湿盒内37℃温育1小时；
（11）PBS冲洗三次，每次5分钟，然后擦干边缘水分；
（12）于荧光显微镜下观察细胞
我的疑问是：1.我的抗体用什么buffer稀释，一抗已经是液体的？
2.二抗是固体的，该用什么试剂溶解，溶解以后的用什么buffer稀释？
3. PBS的配制方法？我该用什么配方的？我手头上的配方与我在园子里看到的不太一致？
在线等，感谢啊~~~
