[求助]我的G0/G1峰有偏差的PI凋亡图(有图)

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标题:[求助]我的G0/G1峰有偏差的PI凋亡图(有图)

阿k[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用PI做JURKAT细胞的凋亡,用别人文献里报道的方法The cells was resuspended in 0.2 ml of lyse buffer (propidium iodide 50 Ag/ml,0.1% citrate, 0.1% Triton X-100). The lysed cells were then incubated in the dark at 4 jC for 24 h.我现在得到的结果发现两组细胞的G0/G1峰不能重叠于一个Y轴处.请问是怎么回事?
先贴对照组的图

附件

2012-7-27 11:29

89902562.jpg (12.31 KB)

阿k[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

实验组:加药．理论上诱导凋亡．

附件

2012-7-27 11:30

73888182.jpg (12.17 KB)

阿k[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问如何看这组图,哪些方面需要改进.我纳闷的一点是实验组G0/G1峰怎么向Y轴偏移了.同样的实验如果用冰乙醇固定处理的方式就不会出现峰偏移的情况.
初次做凋亡,希望得到大家的指点.搜索了一些有关流式有关凋亡的帖子,发现高手很多啊.

大尾巴[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你用的是什么公司的ＤＡＰＩ？是什么型号？我也在做这个

大尾巴[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

ＳＩＧＭＡ有两种ＤＡＰＩ，你选择的是？

阿k[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用的是PI,不是DAPI. 期待正解

wsll[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有没有散点图啊？是不是碎片太多了呢？

园丁##[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

简单说：

自己不知道！！

猜：
1，操作问题？
2，所有细胞都凋亡了，这一部分早期！PI插入的碱基空隙减少，荧光强度降低！？？
3，这种试验方法造成的？
4，其它如gate！

请高手出手！

阿k[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我后来想是不是这种方法里(propidium iodide 50 Ag/ml,0.1% citrate, 0.1% Triton X-100)始终没有用到RNAase的消化,是不是RNA与PI的结合造成了这种峰的偏移.而我用乙醇固定法有一步是加RNAase消化的. 所以也没有出现峰的偏移.不知道这种解释有没道理?

园丁##,你终于来了啊.激动ING.我还MS了U.

可以告诉我你们实验室检测表达有GFP融合蛋白用PI检测凋亡的RPOTOCOL吗(主要是固定)?我搜过了,但是说法不一.木办法,我相信你啊.请给我一次可以得到您PROTOCOL的机会.!谢啦先.

jkobn[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我来解答一下吧.

出现象你"实验组"那样的峰型,按经验来说应该是碎片峰,鉴于你的药诱导凋亡作用,可以认为G0/G1期峰和其凋亡峰部分重叠在一起,分离不开.至于G0/G1期峰移动问题,我认为跟人为操作有关,因为这步操作主观因素较大,不一定就是你的峰真的左移了,而是人为的.

希望能帮助你

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