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标题:[求助]究竟是污染还是细胞碎片?

ququer787[使用道具]
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[求助]究竟是污染还是细胞碎片?


前天传代了一批293细胞,24小时后观察:将培养瓶拿到手中晃了一下,发现瓶底像是有一薄层类似“白沙”的物质悬浮起来;镜下观察细胞均已贴壁伸展,但培养液浑浊不堪,到处悬浮着及其微小的物质,细胞周围不再清澈,似磨砂感,液体上层还漂浮着类似胖大海的绵状物质。立即换液,再次观察,细胞周边及培养液已经变得干净清澈的多了。
今天,当我再次观察,发现细胞又跟昨天一样浑浊不堪,但细胞还是贴附的很好,只是没有增殖(不正常,毕竟293增殖速度非常快)。

请教各位讨论一下,究竟是怎么回事呢?

另外附上搜索的类似帖子一张,描述情况跟我的一模一样。

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/3094047_1.html')
“近来我发现我养的细胞在传代后一天看起来还好好的,可是24小时后就会看到细胞培养液中有大量悬浮的东西,有时会多到遮住看底层贴壁细胞的视线.

然后我换液后立即观察细胞,发现细胞的生长情况还是比较良好,没有什么状态不好的地方.可是换液后24小时后又会看到漂着大量的那种物质.然后再换液,还是看到细胞状态还好,第二天又看到有许多漂浮物......这期间细胞的数量好象不见增加,再次换液后显微镜下看细胞发现细胞还是好好的........

高倍镜下观察,那种杂物好象是细胞碎片,又像是细菌,不过好象看不到有鞭毛等东西,也看不到它自行运动.我实在不能确定,毕竟没真正见过细菌.

请问大家有谁遇到过这种情况,能不能给点建议,我近来都郁闷死了,本来应该一个月前就可以结束的,就是因为这个问题而延误到现在.. ”
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ququer787[使用道具]
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附上图一张。。。。。


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ququer787[使用道具]
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由于不明悬浮微粒的存在,细胞与细胞之间变得非常浑浊不清


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如图箭头所示,即为我所提到的没有具体轮廓、蓬松如胖大海的不明漂浮物。
与下面正常293图相比,细胞间已变得磨砂样浑浊不清


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ququer787[使用道具]
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再附上正常293细胞图(实验尚未完成,抱歉加上水印)
镜下观察细胞之间非常干净清澈,培养液没有任何悬浮物。


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基本可以确定是污染。我觉得更象是霉素。如果你的细胞有冻存的话,这个细胞就不要了。如果你非要抢救的话,你可以按以下步骤进行。我曾用此方法成功抢救因链珠菌污染的细胞。
一、PBS冲洗三遍。
二、消化。
三、再用PBS洗三遍。离心力比平时低点。因为这种污染比细胞小,不易离心下来。减小离心力可以减少污染。
四、加用两性霉素。注意:1、两性霉素难溶于水。配制两性霉素时,先用DMSO溶解,配制成贮存液。然后利用微量移液器取相应的量加入培养液中,配制成工作液。2、因为你现在马上就要加两性霉素,没时间做梯度浓度测试。你现在可以参考文献,直接加几个梯度浓度的两性霉素。3、两性霉素加的浓度与细胞的耐受浓度、污染种类、两性霉素的生产产家有一定关系。4、早晚各换一次。具体换液加药我忘了。反正前几天至少每天换两两次液。后面时间再加预防浓度。然后再用普通培养液培养一周。如果没有再出现,那可能你就成功了。
祝你好运!
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ququer787[使用道具]
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如果是我的培养液污染的话,我可以用过滤的方法去掉这种污染源吗?
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镜下观察培养液有异物呈浮砂状流动多为细菌污染,而且瞧楼主所说的污染出现时间似乎是很快速的,所以可能是生长周期较短的细菌,但具体情形则需更详尽的图片+叙述来鉴定,楼主的图片略嫌模糊了点,所以无法确定的告诉您是何种污染,
事实上,有时死细胞过多也会造成疑似细胞污染的错觉,
但是放大倍率观察两者大小还是有区别的,死细胞团与细胞碎片多呈透亮,污染则结构绵密,且较不透光,
举例:
细菌污染团


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崩解的细胞残骸


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针对污染,如果您的细胞不是很重要的话,我建议您直接丢弃不要救了,重新复苏一管比较好,
因为劳师动众又费力,实话说并不划算,
我试着抢救过几个孔板里的污染细胞一阵子,但一个月后最后还是放弃,因为一时的不舍最后可能导致其它孔的细胞连座污染,不值得,

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