[求助]细胞培养液中出现不明游动小物

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标题:[求助]细胞培养液中出现不明游动小物

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-7-27 13:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

致各位好心的大虾：：
血清、鼠尾胶原、胰酶工作液中均出现貌似小球状或针点状的小点点，有折光度，象小皮球在水中上下浮动状运动；胰酶工作液、血清和鼠尾中的几乎不用培养立马可见，加了小牛血清的培养基经过0.22um过滤后，培养一天过后，也有，只不过数量较少，在400光镜下一个视野也就1~2个吧；在100倍光镜下看不见，但在400倍光镜下则很清楚；
初次出现这种情况时，俺把细胞、培养基、血清全扔了，无菌间除了没用甲醛熏过，也被用消毒水和75%酒精擦拭了n遍，现在俺是百思不得其解的说。
咨询同室的学友，有一姐们说：100倍下看不见的就没关系，而且400百倍下看到的也不多，可以不管，继续培养；问题是：可以这样吗？究竟是什么原因呀？
现在我唯一能怀疑的就是，无菌间里的空气有污染，因为我的试剂均是在操作间里操作的~~~~
所以目前我的疑问是：：1.这种小点怎么会存在？2.可以不管他继续培养细胞吗？3.为什么在血清和鼠尾中反而密度较大呢？
{感兴趣的朋友，请给些建议和回答吧~~~}

owanaka[使用道具]
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发表于 2012-7-27 13:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你先别着急。像你提到的这种情况，很多人都碰到过。

我培养的细胞也出现过这种情况。起先我也扔了好几瓶。但过来不甘心，就做细菌污染试验。
放了快一个星期了，也没见培养基有浑浊，我就觉得不太像细菌污染，然后就换液，杀支原体，之后少了很多，但好像养一段时间又会出现，但数目也不多，对细胞生长似乎影响不大，因为我的细胞长得还不错。
所以，我觉得你可以现不用扔掉他们，先冻一些细胞，再少量养做试验看看是不是严重的污染，会不会影响你的细胞，在做下一步打算。

至于这些东西是什么，我现在也不知道，但查过一些资料。众说纷纭，有说支原体的，细胞碎片的…… 目前较多认为的是一种叫做黑焦虫的说法。认为这是一种像黑色虫子样的东西，在高倍镜下能看到它们围绕细胞做布朗运动，这种东西换液后减少很多，与细胞的生长似乎起拮抗作用，细胞生长好时，它们就低调一些，反之，就比较多一些。
至于这种东西的来源，也没有什么确定说法。目前较多认为的是来自一些细胞的裂解碎片。

dingyy，你也可以搜寻一下相关东西。希望有什么好东西，可以传上来共享

owanaka[使用道具]
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发表于 2012-7-27 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

至于在血清、鼠尾胶原、胰酶工作液中均出现貌似小球状或针点状的小点点，那就比较奇怪了？支原体？
或者只是这些液体中的一些大分子物质？
建议：先做培养试验。静置1个礼拜，观察空培养箱里的这种物质有无疯狂增长？若是污染，肯定会长得很夸张的，若没有太大变化，可以不必理会！

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-7-27 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先非常感谢您的回复{热烈的鼓掌，热情的表扬~~}
我把细胞扔了之后，非常郁闷的同时又分外的不甘心，于是，俺把培养箱和操作间彻底打扫之后，重新来过。用一次性培养板分别检测了鼠尾、小牛血清、抽滤过的培养基和pbs、胰酶，共养了3天，第一天就发现：鼠尾和小牛血清和胰酶在400倍光镜下观察均有小球状或针点状游动物，pbs中没有，培养基在400倍下就有一到2个。3天后，培养基颜色和清亮度都没发生改变，游动物数目好象增加的也不是很多；胰酶中好象还没了，pbs中一直都没有，血清中数目确实应该是没增加，而鼠尾中的数目还是跟从前一样的多~~

找一师兄分析说：胰酶不论工作液还是母液中，应该不会有活着的微生物；如果鼠尾刚高压过的，也不应该有活着的微生物。所以那貌似会游动的东西根本不是个东西，可以不予考虑~~~而且血清是经过0.1um过滤的，基本上不会有会污染的东西存在，至于它里面有什么可以游动的东西，也不会构成细胞污染的来源，只要培养液颜色不变没有浑浊没有霉菌菌丝之类的东西存在，可以继续培养。
非常感谢他的分析：貌似非常在情在理。。

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-7-27 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可我仍心存疑惑，它存在必有它存在的理由和影响。那鼠尾里明显的数目比其他培养液里多又怎么解释呢？？？
我现在唯一的办法是再复苏一瓶细胞，观测对细胞生长的影响，同时再查些资料，或在线搜索别人的经验之谈吧。
感谢了~~~
有什么可以帮忙的请发言~~~~~

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发表于 2012-7-27 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那種東西是蛋白質的沉澱物, 那很常見, 不是污染.
另外, 血清裡的"黑焦虫", 那不是虫, 那也是蛋白質沉澱, 或是草酸鹽沉澱.
如果是污染的話, 那些黑點的增加數量會非常快的,
而且會多到整個液體都明顯混濁起來.

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-7-27 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多谢楼上的解释，貌似可以讲的通，可是它们会动呀~~
我今天刚拍了些照片传上来，大家再参详参详吧

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-7-27 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

血清中的，数量不是很多，那个很黑的东西不是，其他圆乎乎的才是

附件

2012-7-27 13:26

96978447.jpg (1.43 KB)

c86v[使用道具]
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发表于 2012-7-27 13:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我在养LX-2,这两天也遇到了类似的情况,
那东西浮动,一个个黑色的小圈圈粘着成团,或大或小,我开始以为是细菌污染,扔了个大皿.
但培养液很清,细胞也照长,长势也好,铺满了.传了代之后也有,细胞也长很好.
我以为是旧的10%DMEM有问题,就换了新的.但里边有些没洗掉.
观察了几天,反正细胞生长不受影响.也就没管它.
补充一点,那个东西100光镜下看得见.
纳闷.

milkdog[使用道具]
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发表于 2012-7-27 13:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

多谢多谢！我也在复苏细胞了，但复苏效果不是很好，准备重新采样。再发一些图片好了，上次因为网速的问题，只贴了一张。

附件

2012-7-27 13:27

12940234.jpg (34.54 KB)

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