[求助]我养的树突状细胞出现大量条状虫子，细胞在12小时...

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标题:[求助]我养的树突状细胞出现大量条状虫子，细胞在12小时...

abc816[使用道具]
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发表于 2012-7-27 16:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如图，我周二从脐血分离出单个核细胞然后培养分化成树突状细胞，晚上10点才分离完毕，第二天一早从孵箱拿出在倒置显微镜下一看，贴壁细胞数目减少，变圆、肿胀，而吸取出的上清液中的悬浮细胞则大都碎裂！！再仔细微调焦看时，发现了这么在不断蜿蜒***的虫子！！虫子有大有小，昨晚分离时在显微镜下看时是没有的。上午虫子游动很快，镜下可看到其在围攻侵蚀细胞，实验室老师看了说这可能是某种原虫，黑焦虫没这么大。待到下午时，细胞已经分解的差不多，基本看不到成形细胞，如图，但虫子活动度也明显减弱，只翻滚蠕动。
求救啊，回想上两次细胞死亡，可能也是这种虫子作怪，但当时看细胞分解了就倒掉了，没仔细观察。
另，我用培养板培养，实验室其它两位同学养的成纤维细胞和肾小管上皮细胞也出现这种虫子！也是用培养板。用培养瓶养的暂未出现。
有和我出现类似情况的战友吗？有哪位老师知道这种虫子来源及预防措施？请指教啊，近两周的心血全白费了！虫子很毒，12小时就基本可把细胞全杀死了！！
照片为倒置显微镜下400倍，没有细胞作对照，其长度平均为单核细胞直径的2－3倍，虫子直径很小，大约只有细胞直径的十分之一，故观察为线状！

附件

2012-7-27 16:47

48075293.snap.jpg (28.02 KB)

abc816[使用道具]
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发表于 2012-7-27 16:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

紧急求助啊，原代培养一次细胞费很多心血，回想起来这是我第三次失败了，现在我不敢继续干了……

guagua[使用道具]
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发表于 2012-7-27 16:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

toy[使用道具]
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发表于 2012-7-27 16:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是做原代的，也出现过这种情况，实验室老师说这是杆菌污染，我把所有污染的都扔掉了，后来拿培养基做实验培养，发现培养5天时出现好多同样的东西，遂扔掉污染培养基，换用新的干净的培养基再做原代培养后，这种情况消失。所以我想这个应该是细菌污染。

abc816[使用道具]
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发表于 2012-7-27 16:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我以前也出现过这种情况，高倍镜下可以看见有杆状的黑色的物体在游动，这种东西生长的比较快。来源也不是很清楚。如果楼主的培养瓶中这种虫子还不很多的话，建议勤换液，每天一到两次，并且在一瓶培基中加大双抗的剂量，我以前是150ml左右培养基中加入双抗各0.5毫升，一直换液培养至虫子消失。但做实验之前建议换用正常的培养基，并且让细胞在正常培养基中传2-3代后再开始实验，因为双抗对细胞核的合成还是有一定影响。请大家指正。

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谢谢！培养树突状细胞文献上都写的用培养板，故我未尝试过用培养瓶。实验室里用瓶培养的还未出现类似情况。培养板开盖后暴露面很大，如果勤换液会不会造成更大污染的机会？——实验室条件较差。
另我培养细胞的周期为9－111天，5天后细胞就开始悬浮，换液我也担心失掉部分细胞。

abc816[使用道具]
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发表于 2012-7-27 16:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是做原代的，也出现过这种情况，实验室老师说这是杆菌污染，我把所有污染的都扔掉了，后来拿培养基做实验培养，发现培养5天时出现好多同样的东西，遂扔掉污染培养基，换用新的干净的培养基再做原代培养后，这种情况消失。所以我想这个应该是细菌污染。

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谢谢！上次正好把那瓶培养基用光了，换瓶新的。如果是培养基污染，那另两位出现同样情况的同学也是这样吗？我在重庆，是不是最近天气适合这种虫子/杆菌生长，导致实验室空气里存在这种东西？思索中……观望中……

dog002[使用道具]
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发表于 2012-7-27 16:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也刚开始养DC，也出现了“虫子”样的东西。当时吓了一跳，连细胞因子也没敢加。不过杆状的不多，多数是黑色的小圆点样的，活动很迅速的。听实验室的老师和师姐们说，只要细胞长好了，这种小虫子就会少。好像还说，很多临床的标本都会有这种情况。我也不知道为什么，还不知道用什么办法对付这些家伙！对了，补充一下，我也是从脐血来的标本！

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发表于 2012-7-27 16:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

用滤器滤一下试试！

zhenxin[使用道具]
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发表于 2012-7-27 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

跟我的细胞污染有点类似，但我的小虫子好好像只有成虫才有这么长的，活动很快，有些板孔的污染物也是生长很快的，但大部分没有这么快。

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2012-7-27 16:52