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标题:[求助]培养液过滤除菌装置选择问题

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发表于 2012-7-28 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]培养液过滤除菌装置选择问题


细胞培养室刚建成,还没买过滤除菌装置,想买一次性的Millipore针头滤器,可过滤200ml,螺口,然后配以美国BD的30ml或60ml注射器,非螺口,用来过滤DMEM培养基、血清、PBS等，可以吗？我怕不是抽滤的，压力不够，除菌效果不好。有必要买滤器 吗？另外，培养瓶直颈、斜颈有区别吗？冻存管内旋、外旋是什么意思？细胞培养所用液氮罐或-80的冰柜必须专用吗？有其他样品放入，会引起细胞污染吗？请大家指教，谢谢！
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发表于 2012-7-28 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

培养基、平衡盐溶液一般配得量比较大（一般一次一升吧），还是用抽滤过滤器好一些，手推的不是要累死人啊，而且步骤越多过程越慢就越容易污染，建议还是买抽滤型的。
少量的液体可以用注射器推。
血清只要没污染，直接在台子里打开瓶子用就行了，不滤最好，滤起来绝对痛苦死，那个慢啊。
除菌效果取决于你的滤膜的孔径，压力决定的是速度，关系不大。
培养瓶直颈斜颈看你作什么用途，我们培养细胞用斜口的，分离组织细胞有时用直径的，方便镊子进出，其它的区别我也不明白。
液氮罐专用，因为存在冻存管盖子拧不严的情况，液氮可能进入冻存管的，有其它样品太冒险了。冰柜倒不一定，因为空间比较大，又分层，只要处理好别混放应该没问题吧。
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发表于 2012-7-28 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室用的是负压抽滤器，一次可以滤一升，同时还得买个真空泵才行，电动的那种，手压式的也很累人。小滤器完全可以买分开式的，单独买滤膜，滤器反复利用，泡酸高压消毒而已，这样比较划算，当然你M太多的话，另当别论 ！一次性注射器用国产的就可以了，20ml的也就差不多，双鸽的质量不错，同样可以泡酸消毒，但用的过多也就老化了，丢罗。
血清非滤不可的话当然是加到培养液里过滤了，呵呵

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我们实验室用得是millipore公司的正压滤器，包括三盒滤膜，0.22um的，价格不太清楚，可能有点贵，不过确实很好用。

另外滤培养基好像不能用负压抽滤的吧？
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-7-28 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用，都用了五六年了。
RE 楼主：很早买的，不知道价格。抽滤器分两部分，上面是过滤的，带个大塞子，带有磁铁的；下面是平底瓶，不是玻璃的，但也不是普通塑料，可以高压，用完就洗，包好干燥备用，无需泡酸。滤完小心倒入瓶子中分装。真空泵全称是隔膜真空泵，问下器械代理就知道了。真空泵与抽滤器之间有个空气过滤器。正压过滤应该更好，更快，这倒是事实。正压滤器嘛，反正用滤膜与滤器分开的就OK了，质量好是前提，因为要反复用的。注射器BD的肯定更好，但双鸽的也是经ISO9001认证的，注射器的头都差不多大，试一下就知道能不能用了，我只用过20ML的，更大的就不知道了，实用也就OK了，滤膜可以多买点，当初我们一次就买了10盒滤膜，这些个耗材也好试剂也好价格只会越来越高，不过期的长期要用的东东多买些有备无患。我们用的是北京一家公司产的，具体名称忘了，其质量绝不亚于进口的，滤膜表面光滑，边缘整齐，一点都不毛糙。
另外，如果公司推荐的滤器只能和BD的注射器配用的话，那就有捆绑销售之嫌了，以后想换都换不了，还是“兼容”的好

3.内旋的操作起来比外旋容易污染,这只是相对的,但内旋在低温下更容易储存.安全性能高于外旋. 我们用的是外旋的，用了好多没见爆掉一个。转自： cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=6175093&sty=1&tpg=20&age=0')

细胞株，一般也就是给你一瓶细胞，直接传代就成了，不要复苏的。
刻度吸管当然是消毒之前塞棉花了，不要太紧哦，会不好吸的，当然也不能太松。高压时装于不锈钢桶内，桶盖上有个小孔的，注意了和桶上的小孔对好，便于气体出入。“计算细胞的存活率呢？便于细胞冻存”等等问题园内有不少啊，自己SEARCH下。细胞培养 那本书上也介绍得挺详细的。

4.邮寄过来应该是加满培养液的瓶子，里面有贴壁的细胞。悬浮生长的我不知道，呵呵。你再冻存的话在-80度冰箱存活时间是有限的。传几瓶要看细胞数及生长快慢罗。就先传两三瓶好了。一般都是这样。当然是只计数活细胞罗。至于要不要常计数看细胞活力，养得多了久了你自然就明白了
光传代的话没那个必要。用于实验的话开始没经验就计数罗
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发表于 2012-7-28 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再请教一下,你们买的抽滤型滤器都是什么牌子、什么规格的呀！价格大概为多少呢？配的真空泵是什么样的呢？谢谢！
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 小中大
我们实验室用得是millipore公司的正压滤器，包括三盒滤膜，0.22um的，价格不太清楚，可能有点贵，不过确实很好用。

另外滤培养基好像不能用负压抽滤的吧？
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 小中大

忘了提一下，之所以用BD的注射器，因为是公司推荐的，他们说这种可以和针头滤器相匹配，楼上说可以用国产的如双鸽牌注射器，我不知它是否能和滤器配套，因此，想再问一下，是不是只要是注射器，都可用在针头滤器上呢？另外，costar的transwell是一次性的，还是可以重复利用的呢？也许，我的问题都太白痴了，但没办法，我是刚接触细胞培养的。请大家多多帮忙，谢谢！
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 小中大

谢谢大家，总算有点概念了。我还想再问问，你们买冻存管时，是买内旋的还是外旋的呢？还有，我要购买细胞株的话，一次应该买几株啊？如果不考虑价钱的问题，理论上是不是应该买两株以上，防止一株复苏不成功还可以用另外一株呢？再一个，是不是凡是细胞培养，都要计算细胞的存活率呢？便于细胞冻存？有资料说，细胞冻存时细胞存活率要大于90%。如果试验本身不需要，计算细胞的存活率还有其它目的吗？最后一个问题，你们移液时用刻度吸管吗？刻度吸管中是不是要塞棉花呀！塞棉花应该在吸管消毒前塞，还是在消毒后塞呢？我想象不出应该怎样塞！问题太多了，先问这么多，请大家一定要帮帮忙，也许你们简简单单的一句话，会让许多和我一样的新手少走许多弯路，谢谢！谢谢！
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发表于 2012-7-28 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
呵呵，谢谢你的回答。可能我有些表述不清，比如说我在北京，从上海买了一瓶细胞，它邮寄来不是冰冻状态吗？或者我没有直接培养，而是放在冰箱里冻起来，过一段时间再养，岂不是需要复苏？姑且不说这些，一瓶细胞直接传代，大概能分几瓶？说了这么多，我就怕一瓶不够用。还有我问细胞的存活率，实际是想问细胞计数时，只计活细胞数吗？还是根本不用台盼蓝染色，所有细胞都计？还有，细胞培养时是不是要经常检测细胞活力？由此才能判断细胞能否传代？能否冻存？
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 小中大

大家好,又有问题想要请教一下：
一、PBS、Hank’s液等平衡盐溶液，大家一般是买的，还是自己配的？如果买的和文献中的各组分比例不一样，应该以哪个为准？
二、文献中说我养的细胞要以10000-15000/平方厘米的密度接种于T75培养瓶中，培养瓶底面积是75平方厘米，但是在培养时瓶不是平放的吗？如果是这样，细胞生长于侧壁上，又不知侧壁的面积（长方形flask），那应该如何计算每瓶究竟接种多少细胞呢？
三、如果我冻存了很多代细胞，每次复苏时应该复苏哪一代？是最近冻存的这一代吗？
请各位指教，谢谢！
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