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标题:[求助]关于1640的PH

october7[使用道具]
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发表于 2012-7-28 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于1640的PH



各位大侠 :
我配的1640 PH 测量竟然只有6.84 且 颜色偏黄? 这是怎么回事啊? 听说一般配好的培养基基本上在7.2左右，且我用了很多0.1N的NaOH 调了半天才到7.2，我都不敢再往里加NaOH，
这是为什么啊？
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发表于 2012-7-28 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般情况加三蒸水配好后不用调PH的，可能与你1640的牌子与三蒸水的问题，当然还有你测PH的方法有关。调的话0.1N的NaOH浓度太低了，要用高浓度的，至少1N，我们是直接向里加少量NaOH片的，用精密PH试纸测的。
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-7-28 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
缓冲系统呢？
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october7[使用道具]
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发表于 2012-7-28 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是HEPES（干粉里已经有了，25M MOL/升）。 CO2箱的浓度为5%。我看到有的帖子说要加碳酸氢钠的量为3.7克/升！但培养基上的说明是2克/升，希望斑竹能解释一下。我现在很糊涂了，不知怎么办！
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october7[使用道具]
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发表于 2012-7-28 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的 理解是 这样 干粉溶解后的PH 偏酸，再加 NAHCO3 和 NAOH时，由于HEPESD的 缓冲作用，使调PH 需要大量的碱来中和！
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发表于 2012-7-28 18:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你溶1640时就加2g的NAHCO3，这时颜色特深。然后通CO2气，至合适的颜色。我们通常不加谷氨酰胺和HEPES。不好养的细胞才加谷氨酰胺，反复打开多次，培养液太碱了，才补点HEPES.你是不是一开始就加HEPES了。
另外，好像SIGMA的1640就是特酸。
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发表于 2012-7-28 18:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

公司 已经 预先在 干粉里面加了HEPES(25MMOL/L)和谷氨酰胺, 我想不加都不行啊.2克NAHCO3是后来我预先溶解后加再加到溶好了的培养基里面去 的. 培养基是 invitrogen corporation 的
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发表于 2012-7-28 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

再顶下 我用的水用PH试纸 测的时候,试纸没 变色(呈本来的黄色,我不知道到底是由于水太酸显黄色,还是,其他的什么原因啊?
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-7-28 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提个建议，供参考：
1. “配的1640 PH 测量竟然只有6.84 且颜色偏黄”，是因为含HEPES的原因，HEPES的水溶液偏酸性。
2. 在配制HEPES溶液时，需要加NaOH调节pH。
3. 你已经“用了很多0.1N的NaOH 调了半天才到7.2”，过滤就可以了，因为在过滤时pH还会升高0.1-0.2。
4. 以后再配直接用1N NaOH调pH。
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发表于 2012-7-28 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们的经验配置，1640加2g碳酸氢钠混后调ph我直接加400ul浓盐酸，其ph就已经是合适的了，不需要检测。
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