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标题:[求助]关于MTT分组的问题

minran_1980[使用道具]
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发表于 2012-7-30 12:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于MTT分组的问题



最近做MTT，结果始终不那么满意，有个问题想请教各位高手，请大家指点一下，谢谢。做MTT时，到底应该分几个组呢？
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idea2011[使用道具]
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发表于 2012-7-30 12:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

起码要有空白调零孔(只有培养基),溶煤组,不同药物剂量组.如果对细胞的状态拿不定,还要设置正常细胞组.能想到的就这些.
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-7-30 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以分为以下几组:
对照：加细胞、培养液、MTT
给药：加细胞、培养液、不同浓度的药物、MTT
本底：只加培养基、MTT
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minran_1980[使用道具]
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发表于 2012-7-30 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

先谢谢各位大狭的帮助，但我始终不太明白，为什么要设置所谓的空白调零组（只加培养基，不加细胞）？我的分组是正常细胞对照组（细胞悬液+MTT，再用DMSO溶解）、处理组（细胞悬液+不同浓度处理因素+MTT，再用DMSO溶解）。按我的理解，即便是酶标仪在一定的波长处测溶液的最大吸收峰值，也应该是让各孔溶液的颜色一样，即排除颜色的干扰，但是如果按大家说的设置空白调零组，只加培养基，那组间是不是可比性就不强了呢？因为空白调零组（只加培养基）都是有颜色的（我用的是DMEM，橙红色），而另外的正常对照组和处理组最后是把孔内液体吸出，再用无色的DMSO溶液，溶液呈现紫色。那么放入酶标仪中的96孔板的颜色应该是空白调零组（培养基本身的颜色，例如橙红色）、正常对照组（紫色）、处理组（紫色），这样难道不会对实验结果造成影响吗？
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社会主义好[使用道具]
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发表于 2012-7-30 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
设置空白调零组的目的是扣除培养基的影响，这样得到的数据才是细胞的吸收值，其它各组数据应该在减去空白组的基础上进行比较。所以必须设置空白调零组，操作时也需要同样吸出培养液。
MTT另外一个关键因素是要求合适的细胞浓度，不同种类的细胞做MTT实验的合适浓度不同。因此做MTT实验时，一般需要先对正常细胞进行不同浓度下的MTT实验，选择出适合该细胞的实验浓度。
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minran_1980[使用道具]
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发表于 2012-7-30 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那楼上的战友的言下之意是颜色不会对结果有影响？而且即便是要扣除培养基的影响的话也不合理啊，因为在最后放到酶标仪上测试的时候正常对照组和处理组都已经吸去了所有的培养基，只是加了150微升的DMSO作溶剂而已，何来培养基的影响呢？请指教
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-7-30 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我有一事不明,那就是在做MTT时，对正常细胞进行不同浓度下的MTT实验，要什么样的结果才是最佳浓度呢？
我是一个新手，什么都不懂，请多指教。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-7-30 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

何为溶煤组，我不懂
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minran_1980[使用道具]
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发表于 2012-7-30 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我真的很想知道这个问题，每天我都来看看大家的回答，斑竹能帮帮忙也给点意见或者建议吗？谢谢。
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发表于 2012-7-30 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的理解设立空白对照通过与正常组和试验组的对比将490nm波长的光吸收值的差异归咎于细胞（这个单因素）而后通过两者的比较再将差异归咎为活细胞与死细胞的比值。
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