[求助]请教筛选K562细胞对G418敏感浓度的问题

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标题:[求助]请教筛选K562细胞对G418敏感浓度的问题

yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-7-30 13:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问有没有人做过K562细胞对G418的敏感浓度的实验？通常的方法是在24孔板里进行筛选，周期是7天，而K562是悬浮细胞，换液问题如何解决？恳请大家帮帮忙给点建议，非常谢谢！

yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-7-30 13:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

怎么没有人回应呢?悬浮细胞的换液一般都是通过离心，可是在孔板里进行筛选的话，本来每个孔里的细胞数就很少，如果每次换液都离心处理的话，到最后就没剩多少了，再者这么做工作量不小啊，而且每离心一次本来对细胞就有一定的损伤。我真是无计可施了，哪位大侠可以指点迷津？

eric930[使用道具]
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发表于 2012-7-30 13:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

为什么要离心啊，转染　以后应该尽量做到单克隆就可以了啊，然后筛选啊。

baidukk[使用道具]
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发表于 2012-7-30 13:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

悬浮细胞的筛选的确是比较难，通常用低速离心的方法去除死细胞残渣，用300-500转离心3-5分钟，发现细胞死亡多的时候再换液，再加入gcv继续筛选。七天过后，再吸取上清，台盼蓝染色，估算下有多少活细胞。选用杀死90%以上的细胞就是筛选浓度了

yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-7-30 13:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我现在想先试试将24孔板倾斜静置后，小心得吸取上清，看能不能成功。

yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-7-30 13:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还有一个问题想请教，在筛选过程中，死细胞不多时，不用换液，那孔中的培养液PH怎么调节呢？

yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-7-30 13:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼上，你说的离心是整个板离心吗？还有能不能把具体的操作介绍一下,非常感谢！

baidukk[使用道具]
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发表于 2012-7-30 13:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

将各孔细胞吸到离心管中，低速离心。我原来做过H22细胞，也是这样搞定的

yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-7-30 13:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

每次换液都是这样，不会损失很大吗？