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标题:[求助]请问测药物干预后细胞调亡要用同时也用几种方法...

bananapeople[使用道具]
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发表于 2012-7-30 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请问测药物干预后细胞调亡要用同时也用几种方法...



请问各位XDJM测药物作用后细胞调亡一定要有三种以上的方法才有说服力吗？
用MTT 电镜及DNA LADDER 三种方法说服力够了吗？
该如何从众多的方法中来选择呢？迷茫。。。。。。
谢谢！
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dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-7-30 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

凋亡的具体检测方法有很多，本版又一个精华贴，你可以看看。
1首先我觉得你的实验如果专门做凋亡的话（没有其他的试验指标），我想你的方法还是弱了一些，尤其是在具体定量比较方面。MTT是对细胞增殖的一个粗略综合判断（对于凋亡定量几乎没有说服力），电镜及DNA LADDER 是形态学改变指标及凋亡晚期的定性判断，比较起来较粗略（敏感性差，除非有很大的差异不然结果就没有可比性）。
2其次建议你结合你的经济条件，可以选择可以定量比较的实验方法如：sub-g1， av-pi ，tunnel。各种方法在该版均可搜到。
3最后方法越多，当然越说明问题，但是关键是要在能够说明问题上不要有硬伤，其实我个人认为有一到两个关键说明问题的指标，其他的都是锦上添花。
我的看法，请其他战友指正，祝你好运！
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2012-7-30 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢上面两位的指导！！
我是临床的小硕 从来没进过实验室 也没有实验方面的理论，所以现在简直就是一头雾水。。。。
开始是想做MTT 流式 和DNA LADDER 的 可是做流式的Annexin-v-FITC/PI 染色盒要三千多块呢 老板说硕士没那么多钱做 就成现在这样了
那如果做流式不做双染可以吗 就做PI单染也可以吗？？
急切盼望指导 谢谢！
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flower-201[使用道具]
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发表于 2012-7-30 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

检测调亡PI单染就可以
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2012-7-30 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

凋亡是形态学概念，判断凋亡及其程度的金指标一般是DNA ladder和核形态。所以：
1. 除非你怎么做都跑不出ladder（有的细胞模型是非典型凋亡就会出现这种情况），否则DNA ladder是必需要有的。
2. hoechst33258染色核形态也是必须的，而且操作简便，费用十分低廉。
3. 相差显微镜观察细胞形态学改变是一个很好的指标，也是最简便和廉价的指标，结合上述指标对凋亡中晚期和凋亡事件发生顺序有重要的指示作用。
4. 作为形态学和关键生化指标无法定量的重要补充，流式检测AP或者annexinV－PI染色是重要的指标，MTT定量不准，稳定性不足，要不要都可以。
5. 胞内信号传导通路分子的检测可以不要。
6. 凋亡执行阶段的靶物质检测，除了DNA ladder之外，PARP和lamin等细胞基本功能单位的降解也不错，虽然定性能力不如ladder，但是可以定量。
7. tunel对DNA片段化的说明能力比ladder差很多，且定量不准，除非必须进行原位组织凋亡检测，否则一般不要用它。
8. 电镜观察主观性太大，除非科研界洁净无暇或者没办法得到上述的形态学结果，否则不必使用。
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发表于 2012-7-30 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
检测调亡PI单染就可以

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是吗 那太好了 我打听过了 做这个单染的价格还是可以承受的
谢谢！
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发表于 2012-7-30 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
凋亡是形态学概念，判断凋亡及其程度的金指标一般是DNA ladder和核形态。所以：
1. 除非你怎么做都跑不出ladder（有的细胞模型是非典型凋亡就会出现这种情况），否则DNA ladder是必需要有的。
2. hoechst33258染色核形态也是必须的，而且操作简便，费用十分低廉。
3. 相差显微镜观察细胞形态学改变是一个很好的指标，也是最简便和廉价的指标，结合上述指标对凋亡中晚期和凋亡事件发生顺序有重要的指示作用。
4. 作为形态学和关键生化指标无法定量的重要补充，流式检测AP或者annexinV－PI染色是重要的指标，MTT定量不准，稳定性不足，要不要都可以。
5. 胞内信号传导通路分子的检测可以不要。
6. 凋亡执行阶段的靶物质检测，除了DNA ladder之外，PARP和lamin等细胞基本功能单位的降解也不错，虽然定性能力不如ladder，但是可以定量。
7. tunel对DNA片段化的说明能力比ladder差很多，且定量不准，除非必须进行原位组织凋亡检测，否则一般不要用它。
8. 电镜观察主观性太大，除非科研界洁净无暇或者没办法得到上述的形态学结果，否则不必使用。

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恩 看了你的分析迷茫更少了 十分感谢！高手的指点对我帮助太大了。
快要开始做实验了 心里还是有点害怕呢 肯定还有好多问题要请教的 还请多多指教
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wu11998866[使用道具]
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发表于 2012-7-30 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是我们买的双染(晶美)100T才1050元呀,不是很贵,难道是国产的不容易出结果吗?为什么大家不用?
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发表于 2012-7-30 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是我们买的双染(晶美)100T才1050元呀,不是很贵,难道是国产的不容易出结果吗?为什么大家不用?

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好像很多人都是用的北京宝赛的 据说是国产里面比较好的 50 T 1380块
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-7-30 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是吗 那太好了 我打听过了 做这个单染的价格还是可以承受的
谢谢！

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兄弟你高兴得早点，原因如下：
碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，PI只有在细胞破裂的情况下才可以着色。但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及坏死细胞区分开来。PI主要检测坏死或晚期调亡（二者的膜都发生了破裂）。
建议：如果经费紧张，可以用Hoechst染色加PI,很经济，

方法
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