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标题:[求助]细胞复苏前，离心会对细胞有损伤吗？

tie8[使用道具]
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发表于 2012-7-30 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]细胞复苏前，离心会对细胞有损伤吗？


相比之下，冻存液中DMSO如果不除对细胞培养有影响吗？
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2012-7-30 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DMSO在4度以下对细胞无毒，4度以上有毒；复苏必须尽快除去。离心亦有损伤，慢冻速溶！
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tie8[使用道具]
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发表于 2012-7-30 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看来还是得离心了？嗯，谢谢楼上~
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2012-7-30 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般的关于细胞培养的资料都是：如果用DMSO配的冻存液时要离心去除的。我养过hep-2和C6细胞，我想离心有是对细胞的一种损伤，凭实际经验不去除也不会对细胞有太大影响，至少不会导致细胞死亡，可以复苏成功的。我们在复苏之前事先将培养瓶内加培养液5ml，然后放于培养箱内至少5min，在复苏细胞。有可能我养的都是癌细胞，比较抗折腾吧，只供参考。
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cocacola[使用道具]
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发表于 2012-7-30 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般有两种观点，一种认为应该离心，去除DMSO，一种认为没必要，理由是此时DMSO浓度已经很低了，而且离心对细胞有损伤，可以第二天换液就行了。所以当你冻存细胞的密度比较理想时，可以离心去除DMSO，但是如果细胞密度较低，那做好不要离心。直接加培养液，第二天换液就可以了。当然最好自己试试，那最好了。我自己做时并不离心。省去了很多麻烦，细胞状态还行。但是要因细胞而异才好。
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发表于 2012-7-30 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个问题很好啊，一般细胞冻存时DMSO的浓度是10％，复苏前离心的话都是10min，也就是细胞要在10％DMSO中待上十分钟以上（37度融解），可是在做细胞转染的时候，就是用10％DMSO来休克细胞的，最多也不过三分钟（常温），但是在离心这段时间里，DMSO对细胞应该是有伤害的吧，脆弱珍贵的细胞还是不要离心的好。
以前复苏细胞的时候也没有想这么多，都是复苏前离心的，看来凡事还是要动动脑筋才好！
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发表于 2012-7-30 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没必要离心，复苏后6到12个小时换液挺好的
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misswu61[使用道具]
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发表于 2012-7-30 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

加培养液到原来DMSO浓度 的10倍以上，不用离心，还方便。
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发表于 2012-7-30 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个问题我在复苏的时候也考虑过。结果我两种方法都试过了。都成功了。不过个人觉得还是先离心去掉DMSO为好。
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发表于 2012-7-30 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对绝大多数细胞而言，10 % 以下的冷冻保护剂DMSO，不会对细胞贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除， 待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO 者， 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中，离心300 xg (约1000 rpm)，5 分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后， 转移至培养瓶中， 再放入37 °C， 5 % CO2 培养箱培养。我也养过hep-2细胞,按照第一种方法效果不错;和第二种做了一下比较,可以避免解冻后细胞生长状态差或贴附慢的问题.
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