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标题:[求助]请教什么方法能去除培养肝细胞中的纤维细胞？

小荷尖尖[使用道具]
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发表于 2012-7-30 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]请教什么方法能去除培养肝细胞中的纤维细胞？



最近实验中培养的肝细胞中，太多的纤维细胞，影响实验效果，请问各位有没有好的方法去除纤维细胞？不胜感谢！
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-7-30 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没做过肝脏细胞，但看别人做过。从常规的方法和一般的经验讲，你应当从二种细胞的差别中，寻找分离的方法：
1、如果一个是帖壁，一个是悬浮生长的，用帖壁法分离；
2、如果都是贴壁的，二种细胞帖壁的速度有差别，使用差速帖壁法；
3、如果生长速度相差较大，可以在培养体系中加入一定浓度的Brdu，使生长快的细胞由于Brdu刚化DNA结构而生长受阻；
4、如果以上方法没作用，实验要求又很高，可以用磁珠分离法，或流式分选法，只是费用很高。

把话说回来，我看到别人肝脏分离的细胞中，没有很多的成纤维细胞。建议你在实验方法中找原因。一个成熟的实验方法，这样常见的问题应当有解决的办法。
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u234[使用道具]
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发表于 2012-7-30 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用碘丙啶处理，去除成纤维细胞。
不好意思，写错了！应该是碘醋酸。
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-7-30 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用碘丙啶处理，去除成纤维细胞。

请问：碘丙啶 = 碘化丙啶（PI）？
PI只能进入死细胞，而不能穿过完整的细胞膜。具体怎么处理呢？
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-7-30 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在培养基的选择上，一般认为无血清培养基能够抑制成纤维细胞的生长，没有别的方法。
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发表于 2012-7-30 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢以上战友的建议!!!
不过我有点疑问就是：
1.碘丙啶会不会对我的肝细胞生长有影响？？
2.如果正如楼上所说的，我目前用的是无血清的培养基，加入了几种细胞因子，EGF 和GH,同时也加入了高纯度的BSA会不会对纤维细胞有影响？？
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发表于 2012-7-30 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在无血清的培养基里面又加了BSA？
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小荷尖尖[使用道具]
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发表于 2012-7-30 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

无血清的培养基加入BSA主要是和脂类，金属离子，激素等结合，具刺激细胞增值的作用！！（我用的是MERK公司的高纯度的，不含脂肪酸，低内毒素BSA,平时的那种用来封闭抗原肯定不能用于长期培养细胞的）。自己看了一些资料和文献，觉得yangleeyee说的不错，“在培养基的选择上，一般认为无血清培养基能够抑制成纤维细胞的生长，没有别的方法”。 无血清培养基由于没有PDGF（成纤维生长因子），可以抑制纤维细胞生长！！
谢谢各位战友！！
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小荷尖尖[使用道具]
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发表于 2012-7-30 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用在体灌流消化方法,能很好地得到纯的肝细胞!
从头搞定,哈哈,我是这样做的!
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发表于 2012-7-30 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用碘丙啶处理，去除成纤维细胞。

请问：碘丙啶 = 碘化丙啶（PI）？
PI只能进入死细胞，而不能穿过完整的细胞膜。具体怎么处理呢？

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应该是碘醋酸。
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