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标题:[求助]Ｈｅｌａ细胞＊＊＊病了？

101010[使用道具]
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发表于 2012-7-31 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]Ｈｅｌａ细胞＊＊＊病了？


昨天，见两瓶Hela细胞长到了70-80%融合，进行了细胞一传二处理，后４小时、８小时、２４小时内观察见四瓶细胞全和刚传时一样，无任何一个细胞贴壁，培养液呈紫红色，无浑浊，可见少量的细胞团块。培养用液及培养器具都是一星期前进行消毒除菌处理了的。请教各位，高手发生这一现象的原因！！是污染吗？污染源从何而来啊？可否挽救阿？？
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-7-31 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最有可能就是培养基失效了，营养成分不足，影响了细胞的贴壁。可以收集离心之后，换新鲜培养基试试。
你描述没有出现浑浊，污染的可能性不是很大。培养器具消毒之后最好在一个星期内使用。
祝楼主好运！！
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101010[使用道具]
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发表于 2012-7-31 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是新鲜的培养基，血清是去年12月的，和培养基一起进行了０．２２微米膜的过滤处理；在两天前用的是同一瓶培养液细胞还长得很好啊！
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misswu61[使用道具]
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发表于 2012-7-31 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你把血清过滤了？？？
血清里的细胞生长因子过滤后损失会比较大。
一般是不会推荐过滤血清的，实际操作起来也会比较困难。
建议新配一些培养基，过滤后再加血清。

另外，细胞24小时内没有贴壁也是有可能的，可以多放一天看看。Hela细胞还是比较容易养的，可能需要一点耐心吧
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-7-31 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

同意楼上的观点，血清过滤的确不太好，一些细胞因子和胶原都被滤掉了或吸附了，况且操作起来还要费好大力气。

另外培养基呈紫红色，考虑偏碱，该适当调节CO2浓度。
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ququer787[使用道具]
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发表于 2012-7-31 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得细胞刚传代后反复摇动会影响贴壁的。
另外你的培养基呈紫红色，说明培养基偏碱，你可以用PH试纸测PH值，太酸或太碱的环境都会影响Hela细胞生长和贴壁。

另，你消化时间是否过长或EDTA没去除干净而损伤 了细胞膜？Hela细胞是很好养的呀！
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发表于 2012-7-31 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢以上各位同仁的回答！！
1.昨晚把血清量加大了，但是还未见好转。现在是传代后46小时了。
2..操作过程中不存在消化时间过长问题，我的操作是先用胰酶（无EDTA）润洗一遍，后再加胰酶覆盖瓶底，于最多2分钟内终止消化。
3.培养液PH值在7.2~7.4左右，用前已经用PH试纸检测了。因为是无CO2罐培养，加培养液后一小时内，就会观察到培养液变成紫红色，但是我并不能解释原因。
4.真的是血清过滤的问题吗？有没有那位同仁也出现过类似的情况阿？已经传代这么长时间了，就算细胞未死，活力也不行了吧，没挽救的必要了吧？
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2012-7-31 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

武汉的各位仁兄仁姐，能不能馈赠一瓶Hela细胞给小妹啊？实验急啊！又没有冻存细胞！！感激不尽。
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薄荷侠[使用道具]
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发表于 2012-7-31 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢以上各位同仁的回答！！
1.昨晚把血清量加大了，但是还未见好转。现在是传代后46小时了。
2..操作过程中不存在消化时间过长问题，我的操作是先用胰酶（无EDTA）润洗一遍，后再加胰酶覆盖瓶底，于最多2分钟内终止消化。
3.培养液PH值在7.2~7.4左右，用前已经用PH试纸检测了。因为是无CO2罐培养，加培养液后一小时内，就会观察到培养液变成紫红色，但是我并不能解释原因。
4.真的是血清过滤的问题吗？有没有那位同仁也出现过类似的情况阿？已经传代这么长时间了，就算细胞未死，活力也不行了吧，没挽救的必要了吧？

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无CO2罐培养？！
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mimili_901[使用道具]
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 小中大

是啊，有不少地方都是这样养的阿。Hela细胞本身对酸碱的缓冲能力很强。
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