[求助]帮忙分析流式测凋亡的图片

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标题:[求助]帮忙分析流式测凋亡的图片

birdfish[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请高手帮忙分析一下流式测凋亡的图片，多谢。我这两张图第一张是是正常细胞，第二张是凋亡，为什么S期的峰差别这么大那？这两张图有没有比较意义？

附件

2012-7-31 12:28

82017065.jpg (36.98 KB)

birdfish[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第二张图

附件

2012-7-31 12:30

24543376.jpg (35.26 KB)

guagua[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是新手，不是很懂，最近使用流式细胞仪做过几次试验。第一张图比较正常，出现较明显的G1期，S期，G2/M期，结果比较漂亮，正常细胞周期图；第二张图确实出现了凋亡峰，就是G1期峰前面的那个小的“凸峰”。这两张图还是有点意义的。至少说明细胞现在已经出现凋亡，结果分析中凋亡比例应该也是比较高的。
后备S期G2/M期峰差的问题，可能是样品中混有其他细胞或微生物。
新手言误请高手更正！

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1 首先要弄清楚正常细胞是用了做什么的，一般是用来调整电压，标定正常二倍体的位置，好来确定后面做的是否是异倍体，而不是把正常细胞和你做的细胞的周期来做比较

2 第二张图S期高说明细胞增殖旺盛，与正常细胞的S期差别肯定大

3 真正的凋亡是G0G1前面的亚二倍体峰，而不是图中M1门中所示的21.5%

birdfish[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

非常感谢您的解答，请教，按道理讲凋亡增多，S期应该低吧，为什么反而高了那？做凋亡的那个老师说最前面的那个峰是凋亡，G0G1前面的亚二倍体峰不知是怎么回事。请问亚二倍体是怎么回事？多谢指教

birdfish[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教各位下面这张图有没有凋亡细胞

附件

2012-7-31 12:46

25128612.snap.jpg (36.71 KB)

birdfish[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

下面是对照

附件

2012-7-31 12:47

36237664.jpg (79.08 KB)

ha111[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的图片还看不清楚，我猜想你是用Hoechst染色的吧，但是你得细胞变形不明显，你的显微镜的倍数不够高，我猜想应该40倍左右吧，但是这个倍数也能看到，如果你这时候看不清楚，如果你又没有更高的倍数的显微镜，建议你60-72小时继续观察，给你看一张我60小时的照片。我用的是40倍镜。

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

先说AP的那两张：
处理后明显出现AP，但是应该是subG1，而不包括荧光强度很小的那群，因为细胞特点不一样，也不好就百分百排除，但是凋亡既然是精巧调控的PCD，其过程也是有规律的，所以发生凋亡的细胞的DNA loss程度也应该有生物聚集特性，而荧光强度低的那群很有可能是debris containing few DNA fragments，所以跟subG1区别很明显。如果是大流式，建议sorting出来sub-sub和subG1这两群，再拿回光镜下看应该区别很明显的。
至于细胞周期，都诱导凋亡了，cycle能不紊乱吗！所有期的细胞DNA都被切割，所以G2期荧光强度减弱至原来S期的强度，S期的减弱至G1甚至subG1，G1减弱至subG1。而不是S期增值旺盛，再说都凋亡了，还增值啥呀！多思考，想清楚，否则就出现明显的判断失误了。

bohe221[使用道具]
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发表于 2012-7-31 12:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再说后面的两张33258：
前面一张出现大量核物质浓聚固缩的深染核形态的细胞，应该还有部分“分叶核”，但是凋亡小体罕见；后面一张基本上是核物质均匀分布的浅染核形态细胞，差别还是明显的，建议使用400×扫全dish或well，定性后换600×拍照，清楚很多，有利于判断和说明。

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