[]求助]为什么我的细胞总是长的一片一片的?

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标题:[]求助]为什么我的细胞总是长的一片一片的?

finger[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我是养细胞的新手,最近我的细胞总是有各别地方长成一片,还有复层.可是有些地方又长的特别慢.请问是怎么一回事?

abc816[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是新手，有几次传代时细胞没吹开会有这种情况，还有贴壁的细胞会集中在培养瓶的角落
仅供参考，希望高手来指点~

jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

消化后传代的时候,要尽量分散细胞。如果可能，将要传代的细胞过尼龙网，或过4号针头，使成单细胞悬液，再传代（量不要大）。

试试看，这不是什么大的问题。

summerxx[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那是因为你在消化的时候没有消化完全，有的细胞还是成团的．而且在铺细胞的时候没有铺匀，有的地方细胞铺密了，细胞就张过了，形成复层，有的地方铺的密度太小，细胞就张不起来了

finger[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那怎么样就能把细胞铺的比较匀呢?

gmjghh[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不知道你养的是什么细胞，不过我的经历可能会给你些提示。我养vero细胞。刚开始的时候，0.25%的胰蛋白酶是用双蒸水配的，传细胞时倒掉培养液直接加胰酶，室温消化20min都没什么效果。后来我严格了一些：用pH7.4的PBS配胰蛋白酶+0.02%EDTA；传细胞时，倒掉培养液，先用pH7.4的PBS洗细胞两次，再加胰酶，一般室温3-5min即可消化的非常好。另外，配胰蛋白酶的时候，要等完全溶解了再过滤，否则胰酶的效果会很差。

+小生怕怕+[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果你养的是贴壁生长的细胞．如果培养板没有铺被胶原，细胞就不会很好的贴壁生长，往往形成片状聚集生长．如果用胶原板会看到细胞呈现雕刻状很好的贴壁生长．

ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

首先有可能是细胞消化的时候效果不好，镜下观察细胞的状态是成团的，导致细胞团周围的细胞长得比较密集，远离细胞团的地方长得相对来说比较慢，等远离细胞团的地方长成单层的时候，细胞团周围的细胞就会成团簇状或者重叠，建议消化的时候，细胞层断裂开，周围卷边，倒掉胰酶后，将细胞瓶在手上磕两下，细胞呈均匀状下坠时，这时吹打细胞，要用力均匀，若镜下观察细胞还是成团，不成单个分布，那么建议你适当增加EDTA的用量，通常情况下EDTA的浓度是0.2%。

ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其次，如果使用的不是一次性的细胞培养瓶，就要考虑瓶子的原因，细胞瓶上残留有细胞碎片会影响相对应培养瓶位置上的细胞生长，培养瓶泡酸的时候没有洗涤干净，残存的酸会影响细胞的生长，相对位置的细胞生长相对滞后，导致此类现象发生。

S6044[使用道具]
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发表于 2012-7-31 13:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果你的细胞的起始浓度太低的话也有可能会有这样的情况，特别是肿瘤细胞的话，因为你的细胞是单克隆长起来的，建议你传代的时候把细胞数加大，这样的细胞状态也会好转，你可以试试！

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