[求助]关于细胞复苏

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标题:[求助]关于细胞复苏

tie8[使用道具]
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发表于 2012-7-31 14:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞复苏时，从液氮中复苏的好活还是从-80度复苏的好活哦？另外，在复苏过程中，放入37度中，发现根本不可能在60s内溶解，这个该怎么解决呢？

am10[使用道具]
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发表于 2012-7-31 14:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞冻存后复苏因该采用快速融化复苏法，减少缓慢融化时水分渗入细胞造成细胞损伤。细胞复苏应该直接将冻存管直接放入37度温水中，并不断轻轻摇动冻存管，就可以尽快溶解了。好像没有说要60秒内溶完了。按操作尽快溶解就是了。

zwsyrt[使用道具]
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发表于 2012-7-31 14:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在适度的热水中摇啊摇~约1分多钟吧，取出后看不能出现冰晶或管壁没有雾状即可

yychen[使用道具]
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发表于 2012-7-31 14:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如在液氮，则直接放入37℃（其实38℃）也可以，我试过；如在低温冰箱则也可直接放入水浴箱。如楼上二位战友所说，并不断轻轻摇动冻存管，就可以尽快溶解了，还有一点冰晶时即可拿出。不一定是60s了，我的一般是2min；加十倍培养液，低温低速离心3～4min后，吸弃上清，再加10倍左右培养液，吹打均匀后再如上法离心；小心吸弃上清，加适量培养液，轻轻吹打至均匀的细胞悬液，接种于培养瓶即可。
我每次都是这么复苏的，细胞长的很好。不妨试试！
祝实验顺利！

BUK[使用道具]
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发表于 2012-7-31 14:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不一定非要60S不可，只要在37度水浴中不断摇动直到大部分冻存液溶解即可拿到培养室内，此后，可低速离心约5分钟换液或者是将细胞直接稀释到已含有培养基的培养瓶中，待其贴壁过夜后再更换培养液，我两种方法都用过，效果都还行。但对于第二种方法要视细胞的具体情况而定，我用的是231细胞和MCF7细胞，没有问题，You can just try it, good luck!

yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-7-31 14:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果是肿瘤细胞解冻，用四十度的水准备解冻，并不断摇动，如果同时解冻很多支，可以到42度无妨，偶经常这样。

kulee[使用道具]
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发表于 2012-7-31 14:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

液氮中复苏的细胞活力较好，-80度冰箱里的活力会差很多，但是近期（3月内）的细胞活力应该差别不大，所以如果是短期冻存在-80度冰箱里就可以了！

caihong[使用道具]
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