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标题:[求助]MTT问题

woshituzhu[使用道具]
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[求助]MTT问题



我是新手,最近用一种促细胞增殖的蛋白刺激肿瘤细胞,培养72h后, 测MTT,结果显示刺激组的OD值反而比未处理的对照组小,但随着浓度的增大OD值是逐渐增高的(但增高的幅度不大,未统计,不知有无统计学差异),请大家帮我分析一下原因!
由于没有现成的文献参考,蛋白的浓度是我自己摸索的。
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yueban-1147[使用道具]
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你和我做的正好相反,我做的是抑制细胞增殖的,也是肿瘤细胞,结果抑制组的OD值反而比正常组的大,虽然随浓度增大OD值变小,但是统计学处理发现不明显。我也不知道什么原因,可能是浓度太小了。你的可能是浓度太大了。不要迷信国外文献,国内条件很多情况下是不同的。
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2541[使用道具]
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1. MTT本身敏感度就不高
2. 种板均匀与否,密度合适与否 参见 cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=5981872&sty=1')
3. 现用浓度保留,增加一两组更高浓度的试试,一般浓度越高促增殖越强

RE:
你说抑制细胞增殖,增殖因素是啥,细胞的正常生长不能描述为增殖吧,药物组比空白对照组大很好啊。比增殖组小且有统计学意义就行
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气泡[使用道具]
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我也遇到了这种情况,不过我是因为我样品的活性太低了,建议提高样品的活性。
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ququer787[使用道具]
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似乎可以减低种板的细胞密度 不是很确定
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is2011[使用道具]
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我也碰到这种情况。我的是抑制增殖的,可未加药组的OD值比加药组的OD值还小,没法算抑制率。我已做了2次了,而且肉眼看结晶时好象是对的呀,怎么结果是这样的呢?请指点!还有,我们上机用的Magellan软件,除了检测的波长(570nm)外,还要输参考波长,文献上没有,不知应该输多少?我先输的0,不知对不对?非常着急!
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woshituzhu[使用道具]
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我提高了刺激物的浓度,培养24H又测了一次,发现最高浓度的一组OD值明显较对照组高,其余浓度差异不很明显(尚未进行统计学分析),但至少没有“抑制”的现象了。估计还是药物浓度偏低了,可能如楼上所说的活性不行,只有加大浓度再试试了。
欢迎大家继续讨论!
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我做的是两种多不饱和脂肪酸EPA和DHA对肿瘤细胞的增殖的抑制。文献报道中浓度是60umol/l,可是我做到300才有抑制,也就是这组的OD值才比正常或对照的值低。我分析了很多原因,细胞接种不均的原因应该不大。我现在估计是我在向没孔加入药的时候,没有考虑到这两种脂肪酸在培养基中的分散状态,因为他们密度比水轻,会不会浮在面上,而我加药时抢头是在液面下的,会不会因为这个原因导致我其实没孔里的药物浓度远远没有我设定的那么高,因为脂肪酸本身也是细胞生长需要的物质,在低浓度可能有促进细胞增殖的作用虽然文献没有报道。
我考虑加药时要反复吹打混匀。唉,MTT都做了快一个月了,还是没有出结果,郁闷阿! 
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mamamiya[使用道具]
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我做的是两种多不饱和脂肪酸EPA和DHA对肿瘤细胞的增殖的抑制。文献报道中浓度是60umol/l,可是我做到300才有抑制,也就是这组的OD值才比正常或对照的值低。我分析了很多原因,细胞接种不均的原因应该不大。我现在估计是我在向没孔加入药的时候,没有考虑到这两种脂肪酸在培养基中的分散状态,因为他们密度比水轻,会不会浮在面上,而我加药时抢头是在液面下的,会不会因为这个原因导致我其实没孔里的药物浓度远远没有我设定的那么高,因为脂肪酸本身也是细胞生长需要的物质,在低浓度可能有促进细胞增殖的作用虽然文献没有报道。
我考虑加药时要反复吹打混匀。唉,MTT都做了快一个月了,还是没有出结果,郁闷阿! 

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1. 我MTT做了三个月才出各方面都满意的结果,药物浓度就摸死了。文献上的不一定适合于你。
2. 所用药物的厂家不一,纯度不一所需浓度就不一样,我用过国产的和SIGMA的一种天然药物,所需浓度就差很远啊。
3. 多不饱和脂肪酸我就不懂了,密度比水轻那肯定会浮在面上啊,你的细胞是贴壁还是悬浮?
4. 促进细胞的生长不等于促进增殖,脂肪酸不是生长因子或生物活性物质不会促进增殖,我以为。
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. 我MTT做了三个月才出各方面都满意的结果,药物浓度就摸死了。文献上的不一定适合于你。
2. 所用药物的厂家不一,纯度不一所需浓度就不一样,我用过国产的和SIGMA的一种天然药物,所需浓度就差很远啊。
3. 多不饱和脂肪酸我就不懂了,密度比水轻那肯定会浮在面上啊,你的细胞是贴壁还是悬浮?
4. 促进细胞的生长不等于促进增殖,脂肪酸不是生长因子或生物活性物质不会促进增殖,我以为。
参加这个讨论我得了两分,真是好开心,继续努力,向准中级进军!

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RE:
确实也是,MTT本来就是一种不太准确的试验方法,太多的因素会影响结果了。我的药物是SIGMA公司的,纯度最高的,应该没有问题。我查了其中一种脂肪酸的密度为0.94mg/l,比水小,但是因为脂肪酸应该是溶于水的阿, 我加到培养基里去之后应该很自然的均匀分散的。 所以我现在很矛盾,不知道原因在哪里。
从文献上看,多不饱和脂肪酸是抑制增殖的。我只是认为在低浓度的情况下可能会促进增殖,因为脂肪酸可以通过和细胞膜表面的受体结合改变基因的表达调控,我只是猜测,因为文献没有报道过低浓度的情况下是怎么样的。
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