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标题:[求助]1型胶原凝固

shenkunjie[使用道具]
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1
 

[求助]1型胶原凝固


我用的是SIGMA的产品,用0.3N冰醋酸融解,配成2.5MG/ML,使用时用的是胶原:水:10*DMEM:氢氧化钠(0.9N)=4:4:1:1.终浓度是1.0MG/ML.PH大约在7.2附近.可在37度放了4个小时都没有凝固,不知道为什么.不知哪位网友可以指点一下啊?
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ritou1985[使用道具]
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2
 

你确定PH为7.2?按照你的配比不太可能达到PH7.2。另外,以上的组分混合应该在冰上进行,否则容易出现凝块的情况。
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shenkunjie[使用道具]
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3
 

PH值是不是一定要严格意义的7.2啊?我配的大约是那么多.
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shenkunjie[使用道具]
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是要高于7.2啊.再试试.谢谢.
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shenkunjie[使用道具]
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5
 

胶原融完后是无色呢,还是有点发白呢?
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dog002[使用道具]
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6
 

前面的战友分析的都很有道理,我把大家的中和一下,再唠叨几句。
终浓度1mg/ml的1型胶原应该是可以凝固的,而且很快。有几点小的建议,请楼主参考。
1.1型胶原的类型:比较好的是鼠尾胶原,听说还有牛来源的1型胶原,效果比鼠尾胶差很多(没试过,^_^)
2.整个操作过程都要在冰上进行,防止胶原的固化。
3.PH值是个很重要的指标,我个人的理解,既然鼠尾胶是溶于酸性环境的,那么如果配制的胶最终的PH偏酸的话,是不利于胶原固化的,因此PH一定不能含糊,检查一下你融解时的乙酸的浓度是否正确,碱的浓度是否正确,混合之后观察一下整体的颜色是否明显偏黄,如果明显偏黄,说明是过酸了。
4.配制混匀之后即放入培养箱终,半小时内不要拿出来观察或晃动,会影响或者破坏胶的固化。
5.配制后的液体外观颜色因为有指示剂存在,会因你的PH值有所差别,正常情况下应该同平时用的培养液差不多。显微镜下,胶原固化后就是基本透明的无色胶冻状。
6.胶原融完后是无色呢,还是有点发白呢? 不知道指的是用冰醋酸融之后呢,还是配成1.0mg/ml 的时候,前者是无色透明的液体,后者的颜色见5所述。
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shenkunjie[使用道具]
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7
 

1。牛来源的是不是很差啊,我用的就是牛皮肤来源的。不知道要用它的话浓度要多高呢?
2。我用4.5ml 1N的冰醋酸溶解后加水至20ml.不知道有没有什么影响啊,比如说是变性啊什么的。
3。在使用时总感觉溶解后的胶原不是无色透明的,不知道是何缘故。奇怪的是开始使用时虽没有 在冰上操作,时间长了也没有见胶原凝固。
4。因为配制时加有DMEM因里面含有酚红,所以PH不会过酸。所配出来的都是红色的。7。2左右,PH试纸测的6。8-8。2。可能会有一些偏差。
5。乙酸的浓度是否正确,碱的浓度是否正确什么意思?是不是只要调整PH到7。2左右就行呢?
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8
 
我用的1型胶原(鼠尾),Sigma的,1mg/ml可以凝固的很好,操作缓慢,温度高的情况下此胶级凝成一块一块的,无法用于实验。牛皮肤来源的没有用过,不敢妄下论断。
不知道楼主参照的是哪篇文献的Protocol,仔细对照您的做法和文献做法,找出差异,也许有助于问题的解决。
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101010[使用道具]
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另外,参考文献用的是否是牛皮肤来源的胶原?
我的胶原是用0.1N的醋酸溶解的,你用1个N可能是大了点,蛋白变性的条件包括高温,强酸,强碱,高盐等,可能有影响。万一真变性了,应该表现加水不溶才对啊,不知道你看没看到絮状沉淀
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xyw5[使用道具]
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1型胶原牛皮来源的也很好用。友情提醒一下,如果是胶原变性了,胶原基本不凝固(我就遇到这样的情况)。
冰袋上操作是基本要求。
在你混入细胞前可以测试胶原的凝固速度,千万别浪费了自己的细胞。
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