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标题:[求助]HEPES液有用途

hustwb[使用道具]
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发表于 2012-8-1 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]HEPES液有用途



由于刚开始培养细胞所以有些很基础的知识向大家请教：

配制1640培养基时加HEPES的用途是什么？有哪些作用。谢谢
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2012-8-1 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)是一种非离子缓冲液,在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值。
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junhun[使用道具]
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发表于 2012-8-1 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上的说的很好了，再补充点，希望不会画蛇添足 ：能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。
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hustwb[使用道具]
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 小中大
真是太谢谢大家了！
我要配1640培养基，试剂包装上说加2克碳酸氢钠，可是我问过好多人，他们说除了加碳酸氢钠外还要加HEPES。
另外再请教大家一个问题：如果买的培养基是标明了已加入了L－谷氨酸，那么培养基中还需要另外加吗？要是加的话那么培养基中的L－谷氨酸的浓度是多少？
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hustwb[使用道具]
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发表于 2012-8-1 12:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HEPES和碳酸氢钠哪种的缓冲能力好？
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发表于 2012-8-1 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

（1）为什么加碳酸氢钠外还要加HEPES？
额外加入HEPES引起培养基内渗透压增加，与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用可以抵消此。
（2）HEPES和碳酸氢钠哪种的缓冲能力好？
各有千秋吧！HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸)是一种非离子缓冲液,其在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值。但是价格昂贵，高浓度时还对一些细胞有毒。
碳酸氢钠(NaHCO3)是与CO2体系进行缓冲,不涉及渗透压的问题。培养液中碳酸氢钠的量与气相中的CO2的浓度相一致，具有可调节性。用此缓冲液细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。
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发表于 2012-8-1 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近用了1640培养基，第一次使用，没有经验，用的是已配好的液体配基，加10%的血清。
我发现加入培养瓶中10几个小时后，配基就全部变黄了。请问这种情况正常吗，那大概多长时间后换液？
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发表于 2012-8-1 12:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近用了1640培养基，第一次使用，没有经验，用的是已配好的液体配基，加10%的血清。
我发现加入培养瓶中10几个小时后，配基就全部变黄了。请问这种情况正常吗，那大概多长时间后换液？

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正常,变黄是因为细胞代谢物使PH值变低引起的.等培养液变黄后说明该换液了.一般是24H或48小时一换.
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IAM007[使用道具]
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发表于 2012-8-1 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质的必需氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡，因此，各种培养液中有较大量的谷氨酰胺。液体培养基中的L－谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解，应置于－20度冰箱中保存，在使用前加入培养液内。已含有谷氨酰胺的培养液在4度冰箱中储存2周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
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dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-8-1 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用DMEM一般2-3天，2-3天才变黄，为什么1640十几个小时就变黄了？

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正常,变黄是因为细胞代谢物使PH值变低引起的.等培养液变黄后说明该换液了.一般是24H或48小时一换.
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