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这种转染方法已经很成熟了,我这里简单向你介绍两句:
转染的准备:转染前1天,将105的待转染细胞传至60mm培养皿中,完全培养液培养过夜至50%-80%融合;转染DNA的准备:无水乙醇沉淀、70%乙醇洗涤后风干备用。
LipofecTAMINE脂质体介导的DNA转染:A管:于100ul无FCS的DMEM中加入2ug纯化的DNA;B管:于100ul无FCS的DMEM中加入10ul的LipofecTAMINE。将A管B管轻轻混合(C液),室温静置45分钟,见溶液变成云雾状(DNA和Lipofectamine的混合物);其间用于无FCS的DMEM洗涤细胞2次;在800ul无FCS的DMEM中加入DNA-LipofecTAMINE混合物中,混匀后轻加入细胞表面。37℃、5%CO2培养8小时,加1ml含30%小牛血清的培养基继续培养48小时。然后根据你的细胞类型采用不同浓度G418筛选就是了。