液相色谱

通过静脉注射我们的药物，试图从脑中找到这种药物，我们采用HPLC，流速 1ml/min，柱温37，采用乙腈：缓冲液（磷酸二氢钾0.02mol/L）为60：40，一直到5：90峰都不能完全分开，用甲醇改观也不大，请问大家有什么高招，药品是氨基酸衍生物，大分子，主要是改善条件把药物和脑分开，脑是匀浆后，加入乙腈和缓冲液离心得到的上清~~

可以试试1：99，看看是否有效果，但要注意从平衡到作样尽量时间控制在2h，之后加大有机相冲柱子，对柱子不会有太大影响。

试试降低流速或减小进样量，如果要分离的物质分子量差别较大的话可换成凝胶柱试试。

有时需要调一下盐的浓度，或者换成钠盐试试。

1.楼主确定药物可以透过屏障到达脑部吗?有没有相关的文献支持?特别是药品的溶解度问题.
2.样品的处理存在困难,乙腈倒也是不错的溶剂,但是有没有用再具有针对性一点的溶剂?体外的时候用来溶解药品的溶剂试一下?担心的是乙腈把好多东西溶解下来,液相的时候把目标物质的峰给掩盖了
3.流动相的选择,如楼上所说,流动相需要有比较好的分离度.如果连较单纯的药物分离都没有很清楚,那复杂的混合物就更难分清楚.
4.还有一个担心:药物进入体内后有无转换?如果还是用以前的方法检测不一样的化合物那有点困难.
总之,很复杂.呵呵

您确认两种物质对于你现在使用的检测器都有响应了吗？或者已经分开了但是由于其中某一种物质没有响应而误认为没有分离（最好有这些物质的标定确认您的色谱条件适合做这个分析）；用的什么类型的柱子呢?柱子长短有时候也会帮助分离哦；再有就是走走梯度看看有没有效果，流动相配比也可以在灵活些！ph值有注意控制吗

建议换个缓冲溶剂看看！