细胞世界

我培养的兔骨髓基质干细胞，原代第十天，换过两次液。所用的培养基为DMEM－L，20％胎牛血清（杭州四季清）。现在发现一部分贴壁细胞的胞浆内有许多大小不同的成簇气泡，而且有越来越多的趋势。不知是怎么回事？
我的问题：1是否是基质干细胞自己向脂肪细胞转化？
2其实原代培养早期，就发现胞浆里有些许颗粒样物质，并不象教科书上所说的胞浆透亮，而且随着时间的延长，我发现真是这些小颗粒逐渐变成小泡，不知是何原因？

请各为战友帮助解决我的问题？
图一40x

请问你是用什么方法分离的细胞？
据文献报道，骨髓基质细胞在培养中，有细胞自发分化为脂肪细胞的现象。有人认为是本身含有脂肪前体细胞所致，也有人认为是培养基中的成分导致，比如你用20%的血清可能是个原因。作为一个不是单纯的细胞群体，到底是什么细胞分化为脂肪细胞是比较难确定的。
建议可以减低血清的浓度。再次传代时可以不要让细胞长到100%融合，你的细胞看起来比较密集。
可以做细胞爬片，油红O染色看看脂肪染色怎么样。

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这次我用的是全骨髓培养法。但是以前用淋巴细胞分离液后，培养的细胞也会出现这个现象。不知为什么。

你说的可能是培养基的问题。也有人这么说，不过他们说是国产血清的质量不好，营养不够，导致细胞处于相对营养缺乏状态，使得细胞容易向脂肪细胞转化。如果是那样的话，减少血清，不是雪上加霜吗？

我养过一段时间骨髓干细胞，也发现过这样的现象，当时我养了很久没消化。

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这是关键。原代接种时，很难保证瓶底接种的均匀，有些区域细胞容易堆积，而空泡往往就会出现在堆积的细胞内。你原代长期培养，没有用胰蛋白酶消化，也会出现细胞堆积的现象，所以也会出现空泡。
这其中肯定有什么机制，比如说细胞接触挤压，导致分化。。。。。

在培养脂肪基质细胞中也发现原代的细胞胞浆内有小空泡，但在10%的血清下，空泡在传代后消失了。做了脂肪染色，那些小泡没有对脂肪染料有反应。

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为什么降低培养基中的血清含量，会减少空泡的产生呢？有理论依据吗？

这是关键。原代接种时，很难保证瓶底接种的均匀，有些区域细胞容易堆积，而空泡往往就会出现在堆积的细胞内。你原代长期培养，没有用胰蛋白酶消化，也会出现细胞堆积的现象，所以也会出现空泡。
这其中肯定有什么机制，比如说细胞接触挤压，导致分化。。。。。

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这个问题在养脂肪前体细胞的战友那里更常见。养3T3-L1细胞进行脂肪分化的时候，等细胞完全融合后，再继续培养2天，然后开始诱导。据认为是细胞长满发生接触抑制，停止增殖，细胞周期调整进入分化过程。这里面清晰的分子机制，具体的文献本人没有查到，了解不是很多。

为什么降低培养基中的血清含量，会减少空泡的产生呢？有理论依据吗？

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牛血清的主要成份
血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及含量常
随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。

1.蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，球蛋白。
纤维粘连素 细胞促进细胞附着；
α2 巨球蛋白 抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白 促细胞附着；转铁蛋白 能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用。

2.多肽：血小板促生长因子能促细胞分裂，是多肽家庭的主要成员之一，是主要的促细胞增殖因子；成纤维细胞
生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，血清中含量虽很少，但对细胞生长也有一定作用。

3.激素：激素对细胞的作用是多方面的。
胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关。
类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用。
促生长激素：促细胞增殖效应。
氢化可的松：血清中含有定量的该成分，它可能兼有促细胞贴附和增殖作用，但有人证明，血清中的氢化可的松，如细胞密度高时可能有抑制细胞的作用和诱导其发生分化。

4其他成份
氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意
义。
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应该说血清是促使细胞分化的东西还是蛮多的。